Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В. - 21 стр.

UptoLike

Составители: 

Рубрика: 

возможность анализa на любой длине волны (выбор
свободной от помех линии) и более надежные результаты.
Существует несколько способов наблюдения и
регистрации спектров: визуальный, фотографический,
фотоэлектрический, термоэлектрический и др. В современных
спектральных приборах используется фотоэлектрический
метод. Полученная с детектора информация обрабатывается
компьютером, который также управляет прибором.
Атомно-эмиссионная спектрометрия позволяет
осуществлять качественный и количественный анализ пробы.
3.3. Атомно-абсорбционная спектрометрия
Метод атомно-абсорбционной спектрометрии (ААС),
предложенный Уолшем в 1955 г., основан на явлении
селективного поглощения свободными атомами
ультрафиолетового и видимого излучения. Если на свободные
атомы подействовать пучком света от специального источника
излучения, то эти атомы будут поглощать световую энергию.
Уолш, рассчитав соотношение числа атомов в
возбужденном состоянии и числа атомов в основном состоянии,
показал, что оно очень мало даже при 3000 К и составляет для
разных элементов
10
-3
—10
-5
. При воздействии энергии на атомный пар, когда
основная масса атомов находится в невозбужденном
состоянии, наиболее вероятны абсорбционные переходы
электронов с основного уровня на самый низкий
возбужденный уровень. Линии, соответствующие этим
переходам, называются резонансными. Поглощение энергии
атомами, находящимися в возбужденном состоянии, происходит
очень редко.
Обычно атомно-абсорбционные спектры гораздо проще
эмиссионных и состоят преимущественно из резонансных
линий. Благодаря этому уменьшается вероятность наложения
линий других элементов и появления спектральных помех.
Таким образом, если в АЭС концентрация вещества
связывалась с интенсивностью излучения атомов,
находящихся в возбужденном состоянии, то в ААС
аналитический сигнал (уменьшение интенсивности
излучения) связан с числом атомов, находящихся в основном
(невозбужденном) состоянии. Бесспорным преимуществом
ААС является меньшая температурная зависимость
абсолютного количества невозбужденных частиц по
сравнению с количеством возбужденных частиц.
Этим объясняется более высокая чувствительность ААС по
сравнению с АЭС.
Атомно-абсорбционные спектрометры состоят из
источника линейчатого спектра (в отличие от атомно-
эмиссионных спектрометров, в которых анализатор является
одновременно источником возбуждения); атомизатора,
который служит для перевода пробы в атомный пар;
монохроматора, выделяющего область спектра с резонансной
линией определяемого элемента; фотоэлектрического детектора,
преобразующего электромагнитное излучение в электрический
сигнал. В качестве атомизаторов наибольшее
распространение получили пламенные и электротермические
атомизаторы.
Для определения содержания элементов в анализируемой
пробе в ААС применяют методы градуировочного графика или
метод добавок.
Метод градуировочного графика. Для построения
градуировочного графика готовят серию растворов сравнения
(3—5 растворов), содержащих те же компоненты, что и
анализируемый раствор. Измеряют оптические плотности
растворов и строят график в координатах АС. В тех же
условиях измеряют сигнал абсорбции анализируемого раствора
и по градуировочному графику находят его концентрацию.
— возможность анализa на любой длине волны (выбор               линий. Благодаря этому уменьшается вероятность наложения
свободной от помех линии) и более надежные результаты.          линий других элементов и появления спектральных помех.
     Существует несколько способов наблюдения и                      Таким образом, если в АЭС концентрация вещества
регистрации    спектров:   визуальный,    фотографический,      связывалась    с    интенсивностью     излучения    атомов,
фотоэлектрический, термоэлектрический и др. В современных       находящихся в возбужденном состоянии, то в ААС
спектральных приборах используется фотоэлектрический            аналитический     сигнал    (уменьшение      интенсивности
метод. Полученная с детектора информация обрабатывается         излучения) связан с числом атомов, находящихся в основном
компьютером, который также управляет прибором.                  (невозбужденном) состоянии. Бесспорным преимуществом
      Атомно-эмиссионная      спектрометрия       позволяет     ААС является меньшая температурная зависимость
осуществлять качественный и количественный анализ пробы.        абсолютного количества невозбужденных частиц по
                                                                сравнению с количеством возбужденных частиц.
                                                                    Этим объясняется более высокая чувствительность ААС по
            3.3. Атомно-абсорбционная спектрометрия            сравнению с АЭС.
     Метод атомно-абсорбционной спектрометрии (ААС),                 Атомно-абсорбционные     спектрометры     состоят   из
предложенный Уолшем в 1955 г., основан на явлении              источника линейчатого спектра (в отличие от атомно-
селективного       поглощения      свободными       атомами    эмиссионных спектрометров, в которых анализатор является
ультрафиолетового и видимого излучения. Если на свободные      одновременно источником возбуждения); атомизатора,
атомы подействовать пучком света от специального источника     который служит для перевода пробы в атомный пар;
излучения, то эти атомы будут поглощать световую энергию.      монохроматора, выделяющего область спектра с резонансной
     Уолш, рассчитав соотношение числа атомов в                линией определяемого элемента; фотоэлектрического детектора,
возбужденном состоянии и числа атомов в основном состоянии,    преобразующего электромагнитное излучение в электрический
показал, что оно очень мало даже при 3000 К и составляет для   сигнал.     В     качестве     атомизаторов      наибольшее
разных элементов                                               распространение получили пламенные и электротермические
10-3—10-5. При воздействии энергии на атомный пар, когда       атомизаторы.
основная масса атомов находится в невозбужденном                     Для определения содержания элементов в анализируемой
состоянии, наиболее вероятны абсорбционные переходы            пробе в ААС применяют методы градуировочного графика или
электронов с основного уровня на самый низкий                  метод добавок.
возбужденный уровень. Линии, соответствующие этим                 Метод     градуировочного   графика.    Для    построения
переходам, называются резонансными. Поглощение энергии         градуировочного графика готовят серию растворов сравнения
атомами, находящимися в возбужденном состоянии, происходит     (3—5 растворов), содержащих те же компоненты, что и
очень редко.                                                   анализируемый раствор. Измеряют оптические плотности
     Обычно атомно-абсорбционные спектры гораздо проще         растворов и строят график в координатах А — С. В тех же
 эмиссионных и состоят преимущественно из резонансных          условиях измеряют сигнал абсорбции анализируемого раствора
                                                               и по градуировочному графику находят его концентрацию.