ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
84
(11,876 г реактива до 1 л воды). Реактивы предварительно
должны быть высушены в эксикаторе над хлоридом кальция.
Для получения буфера с рН = 7,4 берут 1,92 мл первичного
фосфата калия и 8,08 мл вторичного фосфата натрия. Буфер все-
гда готовят в день его использования.
Для исследования берут 0,1 мл неразбавленной спермы,
наливают ее в центрифужную пробирку, добавляют 0,25 мл
0,2%-ного раствора 2, 3, 5-трифенилтетразолия хлорида на бу-
ферном растворе с рН = 7,4 (раствор тетразолия и пробирки
предварительно должны быть подогреты в термостате при тем-
пературе 38-40°С). Затем содержимое пробирки тщательно пе-
ремешивают, плотно закрывают пробкой и ставят в водяную
баню при температуре 38-40°С. Этот препарат в присутствии
подвижных спермиев при температуре 38-40°С восстанавлива-
ется в красный формазан, что придает и пробе красную окраску.
В качестве контроля используют 0,25 мл 0,2%-ного раствора
тетразолия в пробирке, которую ставят в водяную баню. Время
от начала установки пробы в водяную баню или ультратермо-
стат до появления розовой окраски и является показателем ак-
тивности дегидрогеназ: чем дольше не появляется окраска, тем
ниже активность, и наоборот.
Активность дегидрогеназ в большой степени зависит от
концентрации спермиев в сперме. Для сравнения активности
дегидрогеназ спермы разных эякулятов вводят поправку на кон-
центрацию спермиев, то есть время, прошедшее до появления
окраски и выраженное в минутах, умножают на коэффициент,
во сколько раз концентрация спермиев в пробе спермы превы-
шает стандарт (принятый стандарт – 1 млрд спермиев в 1 мл
спермы). Например, если проба спермы с содержанием в 1 мл
2,5 млрд спермиев окрасилась за 10 мин., то истинная актив-
ность дегидрогеназ составляет 25 мин. (10x2,5 = 25).
Высокой подвижностью, переживаемостью и оплодотво-
ряющей способностью характеризуется сперма петухов с высо-
кой и средней активностью дегидрогеназ (в пределах 18-30
мин.).
Подсчет живых и мертвых спермиев. Оценка спермы по
числу живых и мертвых спермиев основана на том, что живые
спермии, двигающиеся поступательно, не окрашиваются краси-
(11,876 г реактива до 1 л воды). Реактивы предварительно
должны быть высушены в эксикаторе над хлоридом кальция.
Для получения буфера с рН = 7,4 берут 1,92 мл первичного
фосфата калия и 8,08 мл вторичного фосфата натрия. Буфер все-
гда готовят в день его использования.
Для исследования берут 0,1 мл неразбавленной спермы,
наливают ее в центрифужную пробирку, добавляют 0,25 мл
0,2%-ного раствора 2, 3, 5-трифенилтетразолия хлорида на бу-
ферном растворе с рН = 7,4 (раствор тетразолия и пробирки
предварительно должны быть подогреты в термостате при тем-
пературе 38-40°С). Затем содержимое пробирки тщательно пе-
ремешивают, плотно закрывают пробкой и ставят в водяную
баню при температуре 38-40°С. Этот препарат в присутствии
подвижных спермиев при температуре 38-40°С восстанавлива-
ется в красный формазан, что придает и пробе красную окраску.
В качестве контроля используют 0,25 мл 0,2%-ного раствора
тетразолия в пробирке, которую ставят в водяную баню. Время
от начала установки пробы в водяную баню или ультратермо-
стат до появления розовой окраски и является показателем ак-
тивности дегидрогеназ: чем дольше не появляется окраска, тем
ниже активность, и наоборот.
Активность дегидрогеназ в большой степени зависит от
концентрации спермиев в сперме. Для сравнения активности
дегидрогеназ спермы разных эякулятов вводят поправку на кон-
центрацию спермиев, то есть время, прошедшее до появления
окраски и выраженное в минутах, умножают на коэффициент,
во сколько раз концентрация спермиев в пробе спермы превы-
шает стандарт (принятый стандарт – 1 млрд спермиев в 1 мл
спермы). Например, если проба спермы с содержанием в 1 мл
2,5 млрд спермиев окрасилась за 10 мин., то истинная актив-
ность дегидрогеназ составляет 25 мин. (10x2,5 = 25).
Высокой подвижностью, переживаемостью и оплодотво-
ряющей способностью характеризуется сперма петухов с высо-
кой и средней активностью дегидрогеназ (в пределах 18-30
мин.).
Подсчет живых и мертвых спермиев. Оценка спермы по
числу живых и мертвых спермиев основана на том, что живые
спермии, двигающиеся поступательно, не окрашиваются краси-
84
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 82
- 83
- 84
- 85
- 86
- …
- следующая ›
- последняя »
