Биотехнология. Коростелева Н.И - 100 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

АГАУ | Барнаул

Составители: 

Рубрика: 

100
Питательные среды стерилизуют в автоклаве при темпера-
туре 120°С с давлением 0,175-1 атмосфер в течение 20 минут.
Посуду заворачивают в фольгу или оберточную бумагу и
стерилизуют сухим жаром в сушильном шкафу при температуре
180°С в течение 4 часов.
Примечание. Стерилизацию оборудования, воздуха и других
жидкостей смотреть в разделе 5.
2. Контроль качества питательных сред. Питательные сре-
ды для культивирования должны содержать основные питатель-
ные вещества, микро- и макроэлементы. Обязательно контроли-
руют наличие солей азота, сахарозы (не менее 3%), витаминов,
некоторых аминокислот, факторов роста (ферменты и гормоны).
Кроме того, существенное значение имеет состояние среды.
Обычно питательную среду делают твердой, добавляя агар
(0,7-1% массы к объему), однако для некоторых растений (зем-
ляника, вишня, черная смородина, ананасы и др.) или на опре-
деленных стадиях культивирования предпочтительнее исполь-
зовать жидкие среды. Чаще всего используют среды Т. Мураси-
ге, Ф. Скуга (1962), Нича и Уайта.
На первых трех этапах, как правило, используют среду, со-
держащую минеральные соли по рецепту Мурасиге и Скуга, а
также различные биологически активные вещества и стимуля-
торы роста (ауксины, цитокинины) в различных сочетаниях в
зависимости от объекта. В случае, когда наблюдается ингибиро-
вание роста первичного экспланта за счет выделения им в пита-
тельную среду токсичных веществ (фенолов, терпенов и др.),
усилить их рост можно, используя антиоксиданты (аскорбино-
вая кислота (1-60 мг/л), глютатион (4-5 мг/л), поливинилпирро-
лидон (5000-10000 мг/л) и др.). В некоторых случаях целесооб-
разно добавлять в питательную среду адсорбент – древесный
активированный уголь в концентрации 0,5-1%.
На четвертом этапе, добиваясь получения максимального
количества мериклонов, используют среды, содержащие био-
логически активные вещества, а также регуляторы роста. При
этом концентрация цитокининов (БАП) должна быть на уровне
1-10 мг/л, а ауксинов (ИУК и НУК) – до 0,5 мг/л.
На пятом этапе вегетативного клонирования с целью укоре-
нения растений, а также адаптации их к почвенным условиям 
    Питательные среды стерилизуют в автоклаве при темпера-
туре 120°С с давлением 0,175-1 атмосфер в течение 20 минут.
    Посуду заворачивают в фольгу или оберточную бумагу и
стерилизуют сухим жаром в сушильном шкафу при температуре
180°С в течение 4 часов.
    Примечание. Стерилизацию оборудования, воздуха и других
жидкостей смотреть в разделе 5.
    2. Контроль качества питательных сред. Питательные сре-
ды для культивирования должны содержать основные питатель-
ные вещества, микро- и макроэлементы. Обязательно контроли-
руют наличие солей азота, сахарозы (не менее 3%), витаминов,
некоторых аминокислот, факторов роста (ферменты и гормоны).
    Кроме того, существенное значение имеет состояние среды.
Обычно питательную среду делают твердой, добавляя агар
(0,7-1% массы к объему), однако для некоторых растений (зем-
ляника, вишня, черная смородина, ананасы и др.) или на опре-
деленных стадиях культивирования предпочтительнее исполь-
зовать жидкие среды. Чаще всего используют среды Т. Мураси-
ге, Ф. Скуга (1962), Нича и Уайта.
    На первых трех этапах, как правило, используют среду, со-
держащую минеральные соли по рецепту Мурасиге и Скуга, а
также различные биологически активные вещества и стимуля-
торы роста (ауксины, цитокинины) в различных сочетаниях в
зависимости от объекта. В случае, когда наблюдается ингибиро-
вание роста первичного экспланта за счет выделения им в пита-
тельную среду токсичных веществ (фенолов, терпенов и др.),
усилить их рост можно, используя антиоксиданты (аскорбино-
вая кислота (1-60 мг/л), глютатион (4-5 мг/л), поливинилпирро-
лидон (5000-10000 мг/л) и др.). В некоторых случаях целесооб-
разно добавлять в питательную среду адсорбент – древесный
активированный уголь в концентрации 0,5-1%.
    На четвертом этапе, добиваясь получения максимального
количества мериклонов, используют среды, содержащие био-
логически активные вещества, а также регуляторы роста. При
этом концентрация цитокининов (БАП) должна быть на уровне
1-10 мг/л, а ауксинов (ИУК и НУК) – до 0,5 мг/л.
    На пятом этапе вегетативного клонирования с целью укоре-
нения растений, а также адаптации их к почвенным условиям

                             100

Страницы