Изучение биологических объектов методами атомно-силовой микроскопии. Нагорнов Ю.С. - 45 стр.

UptoLike

Составители:

Рубрика:

a) б)

Рис. 31. Сканы эритроцитов, полученные полуконтактным методом [2].

a) – эритроциты макаки резус, осажденные из суспензии. IC mode Форма относительно мягких

эритроцитов млекопитающих искажается даже под действием соседних клеток.

b) - Эритроциты петуха. IC mode. Имеющие ядро эритроциты птиц являются более жесткими

по сравнению с эритроцитами млекопитающих и не искажаются при взаимном контакте.

При осаждении клеток из суспензии получение препарата сложнее, чем в методе мазка.

Например, существует опасность внесения искусственных искажений формы или строения

мембраны, связанных с изменением рН или ионной силы буфера (рис. 28). Для приготовления

суспензии каплю свежей крови смешивают с антикоагулянтом (ЭДТА, цитрат натрия,

гепарин). Неизбежное нарушение баланса между белками крови и солями буфера приводит к

кристаллизации солей в процессе обезвоживания, проявляющихся на скане и искажающих

форму эритроцитов [2]. Удаление солей с помощью дистиллированной воды приводит к

отрыву от подложки сорбированных на ней клеток. Поэтому при работе с суспензиями

следует или использовать иммобилизацию клеток с помощью агентов, связывающих клетки с

подложкой (например, полилизин), или переводить клетки перед осаждением на подложку в

дистиллированную воду. Последнее требует предварительной химической фиксации клеток,

чтобы избежать повреждений и искажений формы, вызываемых низкой ионной силой. В

приведенных сканах на рис.31 использовали метод фиксации клеток параформальдегидом с

последующим переводом клеток в дистиллированную воду.

Кроме этого, искажения формы эритроцитов могут наблюдаться и при суспензионном

случае при контакте двух или нескольких клеток (рис.31а). Поэтому для изучения изменений

формы следует выбирать одиночно расположенные объекты. По литературным данным