Практикум по генетике. Самигуллина Н.С - 35 стр.

               Пыльцу помещают на предметное стекло и пипеткой прибавляют ка-
         плю смеси растворов (1, 2, 3) и через одну минуту добавляют каплю рас-
         твора 4. Перемешивают стеклянной палочкой и накрывают покровным
         стеклом.
               Для плодовых и ягодных растений просмотр проводится сразу после
         нанесения капли раствора 4. Если многочисленные пузырьки выделивше-
         гося кислорода будут мешать изучению препарата, то их удаляют припод-
         нятием покровного стекла. Живая пыльца окрашивается в ярко-розовый
         или темно-красный цвет благодаря наличию пероксидазы, а мертвая оста-
         нется бесцветной или желтоватой. Подсчеты проводят не менее, чем в 3-х
         полях зрения.
               Для свежесобранной пыльцы этот метод дает удовлетворительные
         результаты, но для хранившейся пыльцы результаты получаются несколь-
         ко завышенные.

                          Определение фертильности пыльцевых зерен
               Принято различать жизнеспособность и оплодотворяющую способ-
         ность пыльцевых зерен. По определению Уолдена и Эверетта, жизнеспо-
         собность пыльцевых зерен - это способность мужского гаметофита к росту
         на соответствующих тканях пестика, а оплодотворяющая способность, или
         зиготический потенциал пыльцевого зерна – способность его вызывать
         полное оплодотворение. Оплодотворяющую способность пыльцевых зерен
         еще называют фертильностью. Наиболее надежное определение жизне-
         способности и фертильности дают методы in vivo. Для сравнительных оце-
         нок можно применять и те, которые основаны на реакциях окрашивания.
         Для определения фертильности пыльцевых зерен используют два метода:
         ацетокарминовый и йодный.
               Ацетокарминовый метод. Фиксируют соцветия или цветки со зрелой
         пыльцой в фиксаторе Карнуа. Продолжительность фиксации колеблется от
         30 мин до нескольких часов. Материал промывают и хранят в 80%-м рас-
         творе этилового спирта. После хранения пыльник выкладывают на пред-
         метное стекло и раздавливают в капле ацетокармина. Убрав лишние ткани,
         препарат накрывают покровным стеклом и осторожно подогревают на
         спиртовке.
               Можно определить фертильность пыльцы ацетокарминовым мето-
         дом без предварительной фиксации, т.е. используя свежие пыльники. Не-
         редко материал фиксируют в уксусном алкоголе (3: 1), а затем пыльцевые
         зерна сразу окрашивают ацетокармином.
               У фертильных пыльцевых зерен зернистая цитоплазма и спермии ок-
         рашены в густой карминово-красный цвет. Стерильные пыльцевые зерна
         почти не окрашиваются ацетокармином или окраска неравномерна. Их со-
         держимое часто отходит от оболочки и находится на разных стадиях отми-
         рания. Спермиев в таких пыльцевых зернах нет (рис. 17).



                                                                             35


PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com