Практикум по генетике. Самигуллина Н.С - 38 стр.

               I. Фиксация:
               В качестве фиксатора для этих целей лучше использовать фиксатор
         Чемберлена, который состоит: из 5 частей 40% формалина; 5 частей ледя-
         ной уксусной кислоты и 90 частей 70% этилового спирта или фиксатор
         Карнуа: (100мл спирта – ретификата 90-96 %, 10мг хлороформа, 10 капель
         ледяной уксусной кислоты). В фиксаторе материал может находиться дол-
         го, минимальное время фиксации 12 часов. Фиксацию проводят в бюксах
         или пенициллиновых флаконах, можно пестики помещать в марлевые сал-
         фетки, куда помещается этикетка с указанием объекта и времени фикса-
         ции. Салфетки с пестикоми помещают в банку с притертой пробкой и за-
         ливают фиксатором. После фиксации материал может долго хранится в
         75% спирте.

               II. Промывка, мацерация, окрашивание:
               1.    Слить 75 % спирт в баночку.
               2.    Однократная промывка пестиков водопроводной водой.
               3.    Мацерация в 1н NaOH – 9 часов (или 2н NaOH – 6 часов). Го-
         товим раствор из расчета: 40г на 1л, т.е. 12г NaOH на 300мл дистиллиро-
         ванной воды.
               4.    Промывка пестиков водопроводной проточной водой 1ч, для
         чего заливаем бутылочки с пестиками полностью водопроводной водой,
         ставим в огромную чашку Петри, заливаем её водой и пускаем воду не
         сильной струёй.
               5.    Сливаем водопроводную воду и заливаем дистиллированной
         водой на 10-15 минут.
               6.    Слить дистиллированную воду и приступить к окрашиванию.
               7.    Для окрашивания пестиков используют анилиновый синий в
         концентрации 0,1%. Яркость свечения пыльцевых трубок достигается за
         счет трехзамещенного фосфата калия (K3PO4), который готовится в виде
         1% раствора. Однопроцентный раствор трехзамещенного фосфата калия
         смешивается в объеме (одной части K3PO4 и 3-х частей флюорохрома
         (0,1% анилинового голубого). В эту смесь помещают пестики на сутки.
         При необходимости раствор красителя можно заменять и объект в краси-
         теле может находится долго до 7 дней.




         38


PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com