Составители:
Рубрика:
А.Ф.Сайфитдинова 53
Глава 3. Регистрация и анализ флуоресцентных
изображений
3.1. Фотографирование
Изображение, которое мы фиксируем с помощью флуоресцентной
микроскопии, характеризуется высокой контрастностью и малой
освещенностью. Поэтому время экспозиции значительно увеличивается по
сравнению с обычной светлопольной микрофотографией. При этом может
происходить потеря фокуса, что приводит к получению нерезких снимков.
Более целесообразно использовать пленки с большей чувствительностью, хотя
они и обладают меньшей контрастностью и более крупной зернистостью.
Проблема контрастности изображения не так остро стоит при фиксировании
флуоресценции, кроме того, повысить контрастность можно благодаря
использованию специальных проявителей. Однако не стоит забывать, что такие
проявители могут увеличить и без того крупное зерно. При работе с большими
увеличениями зернистость пленки редко превышает оптическое разрешение
микроскопа, которое обратно пропорционально числовой апертуре объектива,
но это может создать проблемы с увеличением зафиксированного изображения
во время печати фотографии.
Поскольку при использовании узкополосных запирающих фильтров мы, по
сути, имеем дело с монохромным изображением, вполне допустимо
использование технических черно-белых пленок с высокой чувствительностью
(Kodak, Ilford), однако в этом случае необходимо убедиться, что выбранная
пленка обладает достаточно высокой чувствительностью к свету той длины
волны, которую излучает используемый флуорохром. Хорошие результаты
удается получать при использовании бытовых цветных пленок для дневного
света с чувствительностью не меньше 400 единиц ISO (Международная
организация стандартов). Такие пленки обладают равномерной
чувствительностью во всей области спектра, соответствующей видимому свету.
При работе с флуорохромами, имеющими ИК излучение, необходимо
использовать специальные пленки.
При отсутствии встроенного экспонометра параметры съемки приходиться
подбирать методом проб и ошибок, что, в конечном счете, обходится не дешево.
К счастью, современные фотонасадки снабжены встроенными экспонометрами,
позволяющими производить измерения, как основываясь на результатах замера
во всем поле, так и производя измерения только в одной точке (в пятне), как
правило, расположенной в центре поля зрения. Чтобы правильно определить
время экспозиции, необходимо помнить, что для светлопольной микроскопии с
равномерной яркостью производят замер освещенности во всем поле. При
работе с флуоресценцией обычно имеют место отдельные ярко светящиеся
объекты на темном фоне, в таком случае наиболее яркий объект
устанавливается в центральную точку и по ней производится замер
освещенности для определения параметров съемки. Если экспонометр не
позволяет производить измерение в пятне, необходимо уменьшить время
предлагаемой экспозиции на величину, пропорциональную доле
нефлуоресцирующей части поля зрения.
Некоторые микроскопы не снабжаются системой переключения световых
потоков, в результате чего, при фиксации изображения из-за довольно
длительной экспозиции на пленку попадает достаточно постороннего света
через окуляры, чтобы вызвать появление вуали и значительную потерю
контрастности. В таком случае можно доукомплектовать микроскоп
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 54
- 55
- 56
- 57
- 58
- …
- следующая ›
- последняя »
