Роль микроорганизмов в очистке сточных вод от тяжёлых металлов. Буракаева А.Д - 46 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ОГУ | Оренбург

Составители: 

Рубрика: 

метные и покровные стекла, фуксин основной, железоаммиачные квасцы,
N,N-диметилпарафенилендиамин, ацетат цинка, дрожжевой автолизат, кон-
центрированная серная кислота; KH
2
PO
4
,NH
4
Cl,
(NH
4
)SO, Na
2
SO, CaCl
2
, MgSO
4
, лактат Na, NaCl, FeSO
4
,Na
2
S, NaHCO
3
.
Микроорганизмы и их культивирование:
В работе используют несколько представителей сульфатредуциру-
ющих бактерий: Desulfovibrio desulfuricans штамм 2198, D.desulfuricans
штамм 2372, D.вaculatus и Desulfotomaculum nigrifcans. Бактерии культиви-
руют в среде следующего состава (г/л): KH
2
PO
4
– 0,5; NH
4
Cl –0,1; (NH
4
)
2
SO
4
– 7,0; CaCl
2
–0,06; MgSO
4
– 0,06; лактат Na –6,0; лимоннокислый Na (трехза-
мещенный) – 0,3; FeSO
4
-0,01; NaCl –5,0; Na
2
S – 1 мл (0,22 г/л); дрожжевой
экстракт – 1,0; микроэлементы по Пфеннингу и Липперту – 1 мл/л. Отдельно
от основной среды стерилизуют 0,1% раствор FeSO
4 *
7H
2
O в 1% HCl; 5%-
ный раствор Na
2
S в 1% растворе NaHCO
3
; 5% раствор NaHCO
3
; 5% раствор
HCl; 10% раствор дрожжевого автолизата ( стерилизуют при 152 кПа, ос-
тальные компоненты стерилизуют при 202 кПа 30 минут). Раствор микро-
элементов вводят в среду при посеве и стерилизуют также при 152 кПа. Рас-
твор микроэлементов (по Пфеннингу и Липперту) содержит в 100 мл дистил-
лированной воды (мг); ЭДТА – 500; FeSO
4
* 7 H
2
O – 200;ZnSO
4
* 7 H
2
O – 10;
MnCl
2 *
4H
2
O – 3;CoCl
2
* 6H
2
O – 20; H
3
BO
3
– 30; NiCl
2
* 6H
2
O – 2; Na
2
MoO*2H
2
O – 3;CuCl
2
* 2H
2
O – 1.
Для удаления из стерильной среды растворенного кислорода ее кипя-
тят в течение 5 мин и затем быстро и осторожно охлаждают водой. После
этого вносят добавки в следующем порядке: микроэлементы, дрожжевой экс-
тракт, FeSO
4
; далее доводят рН до 7,0 – 7,5 по бромтимолблау с помощью
стерильного раствора бикарбоната и вносят Na
2
S по каплям до образования
сероватого оттенка в среде. В среды немедленно вводят посевной материал
(10% от объема ), разливают доверху в стерильные пробирки и закрывают ре-
зиновыми пробками. Часть среды оставляют незасеянной для контроля. Из
засеянной среды берут пробу на анализ и микроскопирование. Процесс куль-
тивирования ведут в стационарных условиях в термостате при 30
о
С и при
60
о
С для D.nigri-ficans).
Анализы:
Ежедневно снимают по одной пробирке каждой культуры проводят
микроскопирование в фазовом контрасте, следя за изменением морфологии
клеток. Каждый раз подсчитывают число клеток в культуре по Виноградско-
му и результат заносят в журнал. Количественный учет биомассы можно вес-
ти также по приросту белка в культуре, определяемого по биуретовой реак-
ции.
Определение сульфидов:
В процессе развития и диссимиляционной сульфатредукции клетки
выделяют сероводород, который связываясь с присутствующим в среде же-
лезом, вызывает почернение. Определение образовавшегося сульфида в опы-
тах и контрольных пробирках проводят по методуТеппера. В мерные колбы
46
метные и покровные стекла, фуксин основной, железоаммиачные квасцы,
N,N-диметилпарафенилендиамин, ацетат цинка, дрожжевой автолизат, кон-
центрированная серная кислота; KH2 PO4,NH4Cl,
(NH4)SO, Na 2SO, CaCl 2 , MgSO4, лактат Na, NaCl, FeSO4 ,Na 2S, NaHCO3.
       Микроорганизмы и их культивирование:
       В работе используют несколько представителей сульфатредуциру-
ющих бактерий: Desulfovibrio desulfuricans штамм 2198, D.desulfuricans
штамм 2372, D.вaculatus и Desulfotomaculum nigrifcans. Бактерии культиви-
руют в среде следующего состава (г/л): KH2PO4 – 0,5; NH4Cl –0,1; (NH4)2SO4
– 7,0; CaCl2 –0,06; MgSO4 – 0,06; лактат Na –6,0; лимоннокислый Na (трехза-
мещенный) – 0,3; FeSO4-0,01; NaCl –5,0; Na2S – 1 мл (0,22 г/л); дрожжевой
экстракт – 1,0; микроэлементы по Пфеннингу и Липперту – 1 мл/л. Отдельно
от основной среды стерилизуют 0,1% раствор FeSO4 * 7H2O в 1% HCl; 5%-
ный раствор Na2S в 1% растворе NaHCO3; 5% раствор NaHCO3; 5% раствор
HCl; 10% раствор дрожжевого автолизата ( стерилизуют при 152 кПа, ос-
тальные компоненты стерилизуют при 202 кПа 30 минут). Раствор микро-
элементов вводят в среду при посеве и стерилизуют также при 152 кПа. Рас-
твор микроэлементов (по Пфеннингу и Липперту) содержит в 100 мл дистил-
лированной воды (мг); ЭДТА – 500; FeSO4* 7 H2O – 200;ZnSO4* 7 H2O – 10;
MnCl2 *4H2O – 3;CoCl2* 6H2O – 20; H3BO3 – 30; NiCl2 * 6H2 O – 2; Na2
MoO*2H2 O – 3;CuCl2 * 2H2 O – 1.
       Для удаления из стерильной среды растворенного кислорода ее кипя-
тят в течение 5 мин и затем быстро и осторожно охлаждают водой. После
этого вносят добавки в следующем порядке: микроэлементы, дрожжевой экс-
тракт, FeSO4 ; далее доводят рН до 7,0 – 7,5 по бромтимолблау с помощью
стерильного раствора бикарбоната и вносят Na2S по каплям до образования
сероватого оттенка в среде. В среды немедленно вводят посевной материал
(10% от объема ), разливают доверху в стерильные пробирки и закрывают ре-
зиновыми пробками. Часть среды оставляют незасеянной для контроля. Из
засеянной среды берут пробу на анализ и микроскопирование. Процесс куль-
тивирования ведут в стационарных условиях в термостате при 30о С и при
60о С для D.nigri-ficans).
       Анализы:
       Ежедневно снимают по одной пробирке каждой культуры проводят
микроскопирование в фазовом контрасте, следя за изменением морфологии
клеток. Каждый раз подсчитывают число клеток в культуре по Виноградско-
му и результат заносят в журнал. Количественный учет биомассы можно вес-
ти также по приросту белка в культуре, определяемого по биуретовой реак-
ции.
       Определение сульфидов:
       В процессе развития и диссимиляционной сульфатредукции клетки
выделяют сероводород, который связываясь с присутствующим в среде же-
лезом, вызывает почернение. Определение образовавшегося сульфида в опы-
тах и контрольных пробирках проводят по методуТеппера. В мерные колбы



46

Страницы