Основы биотехнологии: культивирование изолированных клеток и тканей растений. Учебно-методическое пособие. Часть 2. Цыренов В.Ж. - 20 стр.

   -   раствор макросолей;                                         ковый холодильник.здесь она охлаждается до 30-35°С (на выходе)
   -   агарированный раствор;                                      и поступает в ферментатор. Непрерывный метод стерилизации
   -   раствор хелата железа;                                      имеет ряд преимуществ перед периодическим методом: возмож-
   -   раствор микроэлементов;                                     ность автоматического регулирования процесса, быстрый и равно-
   -   раствор кальция, нитрата;                                   мерный нагрев среды, обеспечение более полной стерильности
   -   раствор сахара.                                             среды.
      Смеси тщательно перемешивают в течение 5 мин., затем 1-2           Подготовка посевного материала – одна из ответственных
мин ведут вертикальное перемешивание путем барботажа при           операций в цикле биологического методы получения БАВ из куль-
включенной мешалке. Обязательно отбирают контрольные пробы         туры тканей.
для опредления рН среды (рН должно быть в пределах 5,0-6,2;              Культуру ткани (коллекцию культуры) заводы получают из
температура раствора (22 ± 2,5°С).                                 академий и университетов. Каждая культура имеет паспорт с под-
      В промышленных условиях стерилизация питательных сред        робным описанием морфологии, физиологии, характеристики сре-
осуществляется двумя основными методами: периодическим и не-       ды для культивирования и хранения.
прерывным.                                                               Для твердофазного метода культуру ткани выращивают на
      Периодический метод стерилизации применяют при исполь-       агаризованной стерильной питательной среде в колбах вместимо-
зовании небольших объемов среды. Он заключается в том, что         стью 0,25 л в термостатируемом помещении или термостате с тем-
среда, нагретая до определенной температуры (120-125°С) непо-      пературой 27±1°С. на 38-46 сут. Роста ткань материнской культу-
средственно в ферментаторах или в специальных паровых стери-       ры режут ткаим образом, чтобы инокулюм состоял из вертикаль-
лизаторах ГПСД-1700, выдерживается при этой температуре в те-      ного столба (верхний слой, средний и часть нижнего слоя безага-
чение 30-60 мин (в заивисимости от объема среды или от её соста-   ризованной среды). Нельзя допускать воздействия на культуру
ва, после чего охлаждается до 27-30°С).                            дезсредств, бактерицидных ламп, так как это приводит к инактива-
      Непрерывный метод стерилизации целесообразно применять       ции роста. Из материнской культуры пересаживают 7-9 дочерних
при использовании больших объемов среды. Приготовленная сре-       культур и через 38-46 сут. Роста в термостатируемом помещении
да из специального сосуда с помощью насоса подается в стерили-     отбирают колбы с культурами тканей лучших ростовых признаков.
зационную колонну, через которую пропускается острый пар (дав-     Для таких культур характерен быстрый рост, максимальное ис-
ление пара около 5 атм.). Пар подается сверху по внутренней тру-   пользование питательной среды, цвет ткани от светло-желтого до
бе, имеющей щелевидные прорези, благодаря чему пар поступает в     молочного, отсутствие некротических включений.
среду и быстро её нагревает. Среда в колонну подается снизу и            Для глубинного (суспензионного) метода культуру ткани
движется по спирали вокруг внутренней трубы.                       предварительно выращивают на агаризованной стерильной среде в
      Нагретая в колонне до необходимой для стерилизации тем-      пробирках, затем из пробирок высеивают в колбы с жидкой пита-
пературы (около 125°С), среда поступает в специальный аппарат –    тельной средой и проводят две генерации глубинного выращива-
выдерживатель, где она выдерживается при температуре 120-          ния на качалках в течение 38-46 сут. для каждой генерации. Из
125°С. время выдерживания зависит от состава среды и составляет    второй генерации культуры (в колбе) делают посев в небольшой
5-10 мин. Из выдерживателя стерильная среда поступает в змееви-    (10 л) инокулятор, а затем хорошо развивающуюся культуру пере-

                                                         41              42