Основы биотехнологии: культивирование изолированных клеток и тканей растений. Учебно-методическое пособие. Часть 2. Цыренов В.Ж. - 24 стр.

      4.3.2 Выделение и очистка БАВ.                               в частности, получение продуктов для применения в медицине в
      Одной из особенностей стадии выделения и очистки является    качестве лекарственных и диагностических средств, а также для
то, что при выделении БАВ приходится работать с весьма невысо-     исследовательских целей.
кими концентрациями выделяемого вещества (не превышающих                 При разработке процессов получения высокоочищенных
2%). В конце стадии очистки уже имеют дело с более высоким         биопрепаратов используются процедуры тонкой очистки, большая
концентрациями, достигающими 20-30%.                               часть которых заимствована из лабораторной практики. К ним от-
      Цель очистки – извлечение БАВ из нативной жидкости или       носятся хроматографическое разделение, препаративный электро-
из клеток продуцента, концентрация его и освобождение (собст-      форез, изоэлектрическое фокусирование, фракционное осаждение
венно очистка) от сопутствующих примесей и в конечном счете        (органическими растворителями, солями и т.п.) и ряд других. Эти
получение высоко очищенного препарата, пригодного для соответ-     методы используются в различных комбинациях и среди них наи-
ствующего применения.                                              более широкое применение находит хроматография.
      БАВ растительного происхождения под влиянием жестких               Для хроматографического разделения смесей веществ ис-
внешних факторов (повышенная температура, высокая кислот-          пользуют различные технологические приемы, основанные на раз-
ность и щелочность и др.) в ряде случаев теряют свои свойства,     личных принципах взаимодействия компонентов разделяемой сме-
инактивируются. Поэтому при их выделении и очистке необходим       си с хроматографическими материалами (сорбентами).
максимум осторожности.                                                   Наиболее часто используют:
      Стадия выделения и химической очистки включает ряд про-          - ионообменная хроматография (сорбент представляет собой
цессов, начиная от обработки нативного раствора до сушки гото-            твердый носитель, содержащий ионизирующие группы, с
вого очищенного препарата. На этой стадии, в зависимости от               которыми связываются с тем или иным сродством компо-
свойств БАВ, его химического строения и места основного накоп-            ненты разделяемой смеси);
ления применяют различные методы выделения и очистки. В каче-          - распределительная хроматография (сорбент представляет
стве основных методов используют экстракцию с системах жид-               собой нейтральный твердый носитель, на котором сорбиро-
кость – жидкость, экстракцию осадка, сорбцию на различных                 вана неподвижная фаза; подвижной фазой в данном случае
сорбционных материалах, мембранные методы очистки, кристал-               является растворитель, сам процесс основан на распределе-
лизацию, упаривание, сушку.                                               нии компонентов смеси между подвижной и неподвижной
      Методами экстракции и осаждения получают относительно               жидкими фазами);
грубо очищенные препараты – со степенью очистки целевого про-          - хроматография на молекулярных ситах (гель-проникающая
дукта 5-10. Для некоторых целей такой очистки оказывается доста-          хроматография, гель-фильтрация); сорбент представляет
точно, и этим следует пользоваться, поскольку простые по техно-           собой гранулы геля, имеющие поры определенного средне-
логии процедуры с использованием дешевых реагентов приводят к             го размера, в которые могут проникать молекулы компо-
получению препаратов с низкой себестоимостью. Это, в свою оче-            нентов с размером некоторой величины и не могут прони-
редь, положительно сказывается на экономике производства.                 кать молекулы большего размера. В колонке, содержащей
      Во многих случаях, однако, возникает необходимость полу-            такой носитель, объем растворителя доступного для моле-
чения высоко очищенных препаратов. К таким случаям относится,             кул разного размера, оказывается различным: малые моле-

                                                         49              50