Основы экотоксикологиии. Гомбоева С.В - 16 стр.

      Для определения острой токсичности исследуемых            Подготовка тест-культуры. 1. Тест-культуру Can-
вод, водной вытяжки рассчитывается процент погибших в     dida pseudotropicalis, шт. 44 пк, высевают штрихом на
тестируемой воде дафний (А, %) по сравнению с контро-     скошенный сусло-агар или агар Сабуро. Посевы поме-
лем:                                                      щают в термостат при 37°С на 1 сут. Выросшую куль-
                А = (Хк – Хт) / Хк *100%,  (5)            туру хранят в холодильнике, пересевая не реже 1 раза
где Хк — количество выживших дафний в контроле;           в 6 мес.
    Хт—количество выживших дафний в тестируемой воде.           2. Для приготовления водной взвеси бактериологи-
При А ≤ 10 % тестируемая вода или водная вытяжка не       ческой петлей переносят из пробирки часть биомассы су-
оказывает острого токсического действия (безвредная       точной тест-культуры в пробирку с 3—5 мл стерильной
кратность разбавления). При А ≥ 50 % тестируемая вода,    воды и тщательно смешивают.
водная вытяжка оказывает острое токсическое действие            3. Полученную взвесь тест-культуры вносят по 1—
(средняя летальная кратность разбавления).                2 мл в чашки с питательной средой, распределяя ее
                                                          круговыми движениями по всей поверхности агара, по-
                Лабораторная работа № 3                   сле чего избыток взвеси отсасывают и оставляют чашки
       Определение токсичности культур грибов             открытыми до испарения влаги.
     Цель работы - определения токсичности грибов               Ход определения. I вариант. Определение токсич-
родов Fusarium, Stachybotrys, Dendrodochium, выделяемых   ности культур грибов методом бумажных дисков при-
при микологическом исследовании из различных органи-      меняют для исследования чистых культур, выращен-
ческих субстратов (пищевые, кормовые продукты).           ных в пробирках.
     Метод основан на подавлении роста чувствитель-             Культуру исследуемого гриба в бактериологиче-
ного тест-организма Candida pseudotropicalis, шт.44 пк,   ской пробирке на агаре Чапека или сусло-агаре заливают
токсическими метаболитами грибов указанных родов и        8—10 мл одного из органических растворителей (ацетон,
позволяет определить степень токсичности гриба в те-      диэтиловый эфир, этилацетат, смесь хлороформ — ацетон
чение суток.                                              4 : 1) и оставляют на 1 ч, периодически встряхивая.
     Реактивы, посуда, приборы. Ацетон, хлороформ,              Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в выпа-
этилацетат, эфир диэтиловый, агар Чапека, сусло-агар      рительную чашку, и растворитель упаривают досуха в
или агар Сабуро, вода дистиллированная стерильная,        токе воздуха или на водяной бане при температуре 40—
чашки Петри, бактериологические пробирки, выпари-         500С. Затем в выпарительную чашку вносят 0,1—0,2 мл
тельные чашки 6 см, воронки химические 4,5 см, пипет-     ацетона и круговыми движениями обмывают ее по-
ки на 1 и 10 мл, микропипетки на 0,1 мл, трубчатое        верхность.
сверло 8 мм, термостат, холодильник, диски из фильт-            На диск из фильтровальной бумаги наносят 20
ровальной бумаги 8 мм, суточная культура Candida          мкл экстракта и оставляют до испарения растворителя.
pseudotropicalis, шт. 44 пк.                              Затем его накладывают на поверхность питательной
                                                          среды и помещают в термостат при 37 °С. Через 18—24 ч

                                                    31    32