ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
6
Примечание: при наличии определенного опыта обращения с лабо-
раторными мышами возможно взятие опухоли без умерщвления мыши.
Для этого мышь держат в руке, протирают тампоном, смоченным в спирте,
шерсть в области брюшной полости, после чего в брюшную полость вво-
дят иглу шприца и выкачивают асцитную жидкость.
Отмывка опухолевых клеток
Асцитную жидкость из шприца переносят в центрифужную пробир-
ку с физиологическим раствором. Раствор должен иметь комнатную тем-
пературу и его объем должен не меньше чем в 2 – 3 раза превышать объем
вносимой асцитной жидкости. Тщательно но осторожно, не прилагая
больших усилий, стараясь не повредить опухолевые клетки, перемешива-
ют жидкость в пробирке, после чего центрифугируют при 1500 об/мин в
течение 3 –5 минут.
После окончания центрифугирования надосадочную жидкость сли-
вают, а к осадку добавляют физиологический раствор в объеме, не менее
чем в 3 раза превышающем объем осадка. Содержимое пробирки тщатель-
но но осторожно, стараясь не повредить опухолевые клетки, перемешива-
ют. Далее содержимое пробирки снова центрифугируют, как описано вы-
ше, и снова сливают надосадочную жидкость. После этого описанную в
данном параграфе процедуру повторяют еще 1 раз. Таким образом полу-
чают суспензию клеток АКЭ, отмытую от асцитической плазмы путем
трехкратного центрифугирования-ресуспензирования.
Полученную суспензию отмытых клеток АКЭ разводят физиологи-
ческим раствором и подсчитывают в камере Горяева концентрацию кле-
ток. Затем приступают к прививки опухоли.
Прививка опухоли
Приготавливают суспензию клеток АКЭ с таким расчетом, чтобы в 1
мл суспензии находилось 15х10
6
клеток. Для того чтобы перевить опухоль,
необходимо 0,2 мл полученной суспензии (т.е. 3х10
6
клеток) ввести в
7
брюшную полость мыши. Кожу и шерсть мыши-реципиента в месте буду-
щего прокола предварительно обрабатывают спиртом.
Примечание: возможны различные варианты прививки опухоли в за-
висимости от поставленных экспериментатором задач. Например, в целях
простого поддержания опухолевой линии можно (и даже рекомендуется с
целью снижения вероятности контаминации опухоли) вводить опухолевые
клетки животному-реципиенту без их предварительной отмывки физиоло-
гическим раствором. На практике это делают так: набирают в инсулино-
вый шприц 0,3 мл асцитной опухоли из брюшной полости животного-
донора, доводят объем в шприце физиологическим раствором до отметки 1
мл, перемешивают содержимое шприца, вращая шприц между ладоней
вдоль его оси в наклонном положении, после чего вводят 0,2 мл суспензии
из шприца в брюшную полость мыши-реципиента.
Экспериментальная противоопухолевая химиотерапия
Циклофосфан (Cyclophosphanum) - белый кристаллический порошок,
представляющий собой N`-бис-(β-
хлорэтил)- N`-О-триметиленовый эфир
диамида фосфорной кислоты. Растворим
в воде в соотношении 1:50, трудно рас-
творяется в изотоническом растворе NaCl. По механизму своего действия
является алкилирующим цитостатиком. Мышам можно вводить внутри-
мышечно в дозе до 100 мг/кг массы при двукратном введении с интерва-
лом 96 часов или через день в течение всего эксперимента из расчета 6
мг/кг.
При проведении экспериментальной противоопухолевой терапии
оценивают продолжительность жизни животных, объем опухоли, картину
крови. Кровь берут из хвостовой вены с помощью капилляра Сали. В кро-
ви подсчитывают количество лейкоцитов и эритроцитов, концентрацию
гемоглобина, расчитывают содержание гемоглобина в одном эритроците.
H
2
C
H
2
C
H
2
C
O
P
NH
N
CH
2
CH
2
CH
2
Cl
CH
2
Cl
O
