Биотехнология. Коростелева Н.И - 115 стр.

9. Как осуществляется стерилизация посадочного материала?
10. Каким образом стерилизуют питательные среды?
11. Что такое холодная стерилизация?
                 Лабораторная работа 7
      Получение и культивирование каллусной ткани
                из корнеплодов моркови
    Цель работы: научиться получать каллусную ткань из веге-
тативных органов растений.
    Материалы и оборудование: корнеплоды моркови; проб-
кобуры, стерильный скальпель, стерильный пинцет, стерильная
чашка Петри, стерильные листы бумаги, чашка Петри со сте-
рильной питательной средой М-С с добавлением 2 мг 2,4-Д и
0,2 мг кинетина на 1 л.
    Объяснение. Образование каллуса происходит в области
первичных или вторичных меристем, а также из паренхимы,
прилегающей к этим меристемам или вторичным сосудистым
тканям. Инициация каллуса из паренхимы или камбия активиру-
ется наличием в экспланте зрелой сосудистой ткани.
    Процесс каллусообразования зависит от размера эксплан-
та. Чем он крупнее, тем разнообразнее набор клеток. Первич-
ный эксплант обычно имеет размер 5-10 мм3 и массу 20-100 мг.
                        Ход работы
    Отобрать здоровые корнеплоды моркови, тщательно вымыть
щеткой с мылом, затем отмыть водопроводной водой и погру-
зить для стерилизации в 96%-ный этанол и на 5 минут без даль-
нейшей отмывки стерильной водой.
    В стерильных условиях отрезать верхнюю часть корнеплода
моркови и стерильным пробкобуром извлечь цилиндры из тка-
ни. Эксплант корнеплода моркови должен содержать ксилемму,
флоэмную паренхиму и камбий. Вычлененные цилиндры помес-
тить в стерильную чашку Петри и разрезать на диски шириной
1-2 мм, сделать надсечки и перенести с помощью пинцета на
питательную среду М-С, содержащую 2,4-Д и кинетин. Культи-
вировать в термостате при температуре 250С. Через три недели
рассмотреть каллусную ткань.

                            115