Биотехнология. Коростелева Н.И - 113 стр.

    Диацид готовят, растворяя отдельно 330 мг этанолмеркур-
хлорида и 660 мг цетилпиридиния хлорида в горячей воде (око-
ло 300 мл), затем их смешивают и доводят объем жидкости до
1 л, добавляют несколько капель детергента твин-80; хранят в
плотно закрытой колбе в темноте. Перед стерилизацией ткань
растения предварительно очищают. Корнеплоды, клубни, тол-
стые стебли растений тщательно моют щеткой с мылом в теплой
проточной воде, снимают кожу (у корней и корнеплодов), кору
(у листьев), промывают дистиллированной водой и опускают на
несколько секунд (семена – на 1-2 минуты) в 70%-ный этиловый
спирт. Обработка тканей этанолом повышает эффект основного
стерилизующего раствора. Затем растительные объекты много-
кратно прополаскивают в стерильной воде.
    Пергидроль рекомендуется использовать для фасоли, люпи-
на, подсолнечника (с очищенной кожурой), сулему – для тома-
тов, тыквы и др. Продолжительность стерилизации семян суле-
мой составляет 10-15 минут, пергидролем – 30 минут, для мери-
стем и кусочков тканей требуется примерно в 2 раза меньше
времени. Опушенные семена (хлопчатник) обрабатывают кон-
центрированной серной кислотой в течение 5 минут. Легче все-
го семена отмываются от пергидроля. После сулемы и диацида
воду меняют 5-6 раз.
    Семена помидоров, яблони, тыквы, бобов и табака ко време-
ни созревания заключены в мясистые, деревянистые или кос-
тянковидные покровы. Поэтому здоровые, с неповрежденной
поверхностью плоды этих культур следует достаточно тщатель-
но промыть мыльной водой, затем несколько раз спиртом, после
чего в строго асептических условиях их разрезают. Стерильным
пинцетом вынимают семена и помещают их в стерильные чашки
Петри для проращивания.
    Стерилизация питательных сред. Разлитые в пробирки пи-
тательные среды закрывают ватными пробками, заворачивают в
целлофан и автоклавируют при температуре 1200С и давлении
1 атм. в течение 20 мин.
    Холодная стерилизация. Органические жидкости, не выно-
сящие нагревания, освобождаются от бактерий при пропускании
через стерильные мелкопористые бактериальные фильтры с
диаметром пор 0,45 мкм.

                            113