Спектрофотометрическое определение аминокислот в водных растворах. Котова Д.Л - 43 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

43
6.3. Определение триптофана
На рис.15 приведен спектр поглощения триптофана . Для него
характерно наличие слабых полос поглощения при 196 и 279 нм и
интенсивной полосы поглощения с максимумом 219 нм . Величина ε для
полосы поглощения в максимуме поглощения при 219 нм имеет величину
ε
279
= 5,63·10
3
± 0,17·10
3
л/моль·см .
λ
, нм
А
196 219 279
Рис.15. Спектр поглощения триптофана
Для определения области концентраций, в которой соблюдается
основной закон светопоглощения и абсорбционность имеет оптимальные
значения, используют раствор с концентрацией 0,15·10
-3
моль/ л. Затем
методом последовательного разбавления получают стандартные растворы
в области концентраций 0,04·10
-3
– 0,15·10
-3
моль/ л, для которых величина
абсорбционности линейно зависит от концентрации и имеет оптимальное
значение (рис.16).
y = 56.34x + 0.0117
R
2
= 0.9975
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
00,0040,0080,0120,016
C*10
3
,
моль/дм
3
А
Рис.16.
Градуировочный
график для определения
триптофана в водном
растворе при
λ = 279 нм ,
рН = 5,77,
С = 0,04 – 0,15
ммоль/ дм
3
,
ε = 5,63·10
3
± 0,17·10
3
л/(ммоль·см ) 
                                            43
                             6.3. О пределение т рипт оф ана

       Н а ри с.15 при вед ен спектр поглощ ени я три птоф ана. Д ля него
характерно нали чи е слабы х полос поглощ ени я при 196 и 279 нм и
и нтенси вной полосы поглощ ени я с макси му мом 219 нм. В ели чи на ε д ля
полосы поглощ ени я в макси му ме поглощ ени я при 219 нм и меет вели чи ну
ε 279 = 5,63·10 ± 0,17·10 л/моль·см.
               3         3


                         А




                                                                     λ, н м

                               196       219                   279
                         Ри с .15. С пект р поглощен и ят р и пт офан а
     Д ля опред елени я области концентраци й , в которой соблю д ается
основной закон светопоглощ ени я и абсорбци онность и меет опти мальны е
з начени я, и спользу ю т раствор с концентраци ей 0,15·10-3 моль/л. Затем
метод ом послед овательного разбавлени я полу чаю т станд артны е растворы
в области концентраци й 0,04·10-3 – 0,15·10-3 моль/л, д ля которы х вели чи на
абсорбци онности ли нейно зави си т от концентраци и и и меет опти мальное
з начени е(ри с.16).
   1,0       А
                                                               Ри с .16.
                                                               Г р адуи р овочн ы й
                                                               гр аф и к дляопр еделен и я
   0,8
                                                               т р и пт оф ан а в водн ом
                                                               р ас т вор епр и
   0,6
                                                               λ = 279 н м ,
   0,4                                y = 56.34x + 0.0117
                                                                р Н = 5,77,
                                         R2 = 0.9975
                                                                С = 0,04 – 0,15
   0,2                                                         м м оль/дм 3,
                                                      C*103,   ε = 5,63·103 ± 0,17·103
   0,0                                              моль/дм3   л/(м м оль·с м )
         0       0,004       0,008   0,012      0,016

Страницы