Физико-химические основы биолюминесцентного анализа - 61 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

СФУ | Красноярск

Составители: 

Рубрика: 

121
полагается, что именно это соединение является эмиттером
биолюминесценции. Структурная формула гидроксифлавина
приведена на рис.15а. Спектр биолюминесценции показан на
рис.18-19.
FMNН
2
получают фотовосстановлением FMN в присутст-
вии ЭДТА видимым светом в змеевике (рис.33) с водяным ох-
лаждением. В качестве источника света используется обычная
настольная лампа. Затем через дозатор FMNН
2
поступает в кю-
вету с реакционной смесью, предварительно помещенную в
биолюминометр, и запускает биолюминесцентную реакцию.
Световой сигнал регистрируется по индикаторному табло био-
люминометра или с помощью самописца.
Рис.33. Установка для регистрации биолюминесценции
(моноферментная система)
Самописец
Дозатор
Биолюми
нометр
Змеевик
Лампа
122
Биолюминометр сконструирован в СКТБ "Наука" (Красно-
ярск). Основа биолюминометра - фотоэлектронный умножи-
тель (ФЭУ), который преобразует световой сигнал в
электрический и усиливает его. Используемый в данном био-
люминометре ФЭУ имеет максимум чувствительности при 410
нм и рабочий диапазон 300-600 нм. Биолюминометр регистри-
рует суммарный световой поток со всего рабочего диапазона.
Цель работы
состоит в регистрации люминесценции био-
люминесцентной реакции
Используемые реактивы и растворы:
- тетрадеканаль, спиртовый раствор 0.25 об.%;
- деканаль, спиртовый раствор 0.25 об.%;
- флавинмононуклеотид (FMN), (54 мкМ раствор в 0.01 М
ЭДТА);
- препарат фермента;
- фосфтатный буфер 0.02М, рН 7.0.
Состав реакционной смеси:
1. 50 мкл 0.0025%-ного водного раствора альдегида;
2. 5 мкл препарата люциферазы;
3. 200 мкл 0.25 M фосфатного буфера, рН 7.0;
4. 300 мкл FMNН
2
.
Ход работы
Перед началом работы готовят нужные концентрации ре-
активов.
1. 50 мкл 0.25%-ного спиртового раствора тетрадеканаля
разводят в 100 раз фосфатным буфером (добавляется 5 мл бу-
фера).
2. К стандартной упаковке препарата люциферазы добавля-
ется 0.5 мл буфера. Измерение свечения должно производиться

Страницы