Физико-химические основы биолюминесцентного анализа - 65 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

СФУ | Красноярск

Составители: 

Рубрика: 

129
4. 200 мкл 4 10
-4
М раствора NADH;
5. 50 мкл 5,4 10
-4
M раствора FMN.
Строим зависимость интенсивности биолюминесценции (I)
от количества КРАБа (мл).
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА N4 (4 ЧАСА).
ДЕЙСТВИЕ НА БИОЛЮМИНЕСЦЕНЦИЮ МОЛЕКУЛ
КРАСИТЕЛЕЙ
Молекулы красителей принадлежат к V спектрально-
люминесцентной группе (см. табл. 2) и характеризуются корот-
коживущей (τ
0
≈ 10
-7
- 10
-10
с) эффективной флуоресценцией
π
,
π
*- (или
π
l,
π
*)-типа. Типичный представитель красителей -
родамин 6Ж. Квантовый выход его флуоресценции в водных и
спиртовых растворах достигает 1. Спектр поглощения и флуо-
ресценции родамина 6Ж приведены на рис.34. Здесь же пока-
зан спектр биолюминесценции.
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
350 450 550 650
длина волны, нм
I
Рис.34. Спектр биолюминесценции (——————— )
Спектр поглощения родамина 6Ж в воде ( – – – – – – – – – )
Спектр флуоресценции родамина 6Ж в воде (···························· )
Спектр биолюминесценции в присутствии родамина 6Ж (▬▬▬▬▬)
130
Заштрихованная площадь на рис.34 - перекрытие спектров
поглощения родамина 6Ж и биолюминесценции, определяю-
щее эффективность межмолекулярного переноса энергии (S
БЛ
*
→ S
родамина
*, где S
БЛ
*- нижнее синглетное возбужденное со-
стояние эмиттера биолюминесценции, S
родамина
* - нижнее синг-
летное возбужденное состояние молекулы родамина), а также
эффективность абсорбции биолюминесценции молекулами ро-
дамина. На этом же рис.34 показан спектр биолюминесценции
в присутствии родамина 6Ж. Коротковолновый пик в этом
спектре - биолюминесценция, а длинноволновый - сенсибили-
зированная люминесценция родамина.
Цель работы
состоит в регистрации сенсибилизированной
люминесценции родамина 6Ж в биолюминесцентной бифер-
ментной системе.
Ход работы
Используемые растворы те же, что и в работе N2.
Приготовить 10
-5
М раствор родамина 6Ж.
Провести 2-3 контрольных замера биолюминесцентного
сигнала без родамина. Затем добавлять различные объемы это-
го раствора (5 – 50 мкл) в биолюминесцентную систему перед
FMN (6-8 точек).
Состав реакционной смеси:
1. 50 мкл 0.0025% -ного водного раствора альдегида;
2. 5 мкл КРАБа;
3. 200 мкл 0.25 M фосфатного буфера, рН 7.0;
4. 200 мкл 4 10
-4
М раствора NADH;
5. 0-50 мкл р-ра родамина 6Ж (С=10
-5
М). Нулевая концентра-
ция родамина соответствует контрольному замеру;
6. 50 мкл 5,4 10
-4
M раствора FMN.
Построить зависимость интенсивности биолюминесценции
в относительных единицах (I/I
0
, где I
0
- интенсивность биолю-
минесценции в контрольном опыте: I - интенсивность биолю-

Страницы