Составители:
Рубрика:
50
образуется через 4…6 недель с момента начала культивирования. Для того
чтобы не произошло старения (утраты способности к делению) и
отмирания каллусных клеток, первичный и пересадочный каллус
(трансплант массой 60…100 мг) переносят на свежую питательную среду
через каждые 28…30 дней. Эта операция (пассирование) даёт
возможность поддерживать способность клеток к делению (пролиферации)
в течение десятков лет.
Каллусная ткань состоит из гетерогенных клеток, которые могут
различаться по числу хромосом. Генетическая нестабильность может быть
вызвана неоднородностью исходного растительного материала,
длительным пассированием каллусных клеток, а также действием на
генетический аппарат клетки фитогормонов, входящих в состав
питательной среды (Калашникова, Родин, 2004). Однако не всегда
каллусные клетки характеризуются генетической нестабильностью.
Каллус, полученный из изолированных зародышей ели обыкновенной,
сохраняет генетическую стабильность при длительном
субкультивировании, а полученные из него регенеранты идентичны
исходному клону.
При наличии ингибирования роста первичного экспланта фенолами,
терпенами или другими вторичными соединениями применяются
антиоксиданты. Делают либо омывку эксплантов слабым его раствором в
течение 4…24 ч, либо непосредственным добавлением в питательную
среду. В качестве антиоксидантов используют аскорбиновую кислоту
(1 мг/л), глютатион (4…5 мг/л) или дитиотриэтол (1…3 мг/л) и др. В
некоторых случаях целесообразно добавлять в питательную среду
адсорбент - древесный активированный уголь в концентрации 0,5…1 %.
Продолжительность первого этапа может колебаться от 1 до 2 месяцев, в
результате чего наблюдается рост меристематических тканей и
формирование первичных побегов.
На втором этапе основную роль при подборе оптимальных условий
культивирования играют соотношение и концентрация внесенных в
питательную среду цитокининов и ауксинов. Из цитокининов наиболее
часто используют БАП (6–бензиламинопурин) в концентрации 1…10 мг/л,
а из ауксинов – ИУК (индолил 3-уксусную кислоту) или НУК
(нафтилуксусную кислоту) в концентрациях до 0,5 мг/л. При проявлении
токсического действия цитокининов вследствие накопления их в тканях
необходим переход на среды с меньшей концентрацией цитокининов или
чередование циклов культивирования на средах с низким и высоким
уровнем фитогормонов (Катаева, Бутенко, 1983).
На третьем этапе, как правило, меняют основной состав среды: в
2…4 раза уменьшают концентрацию минеральных солей по рецепту
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 48
- 49
- 50
- 51
- 52
- …
- следующая ›
- последняя »
