Изучение биологических объектов методами атомно-силовой микроскопии. Нагорнов Ю.С. - 28 стр.

UptoLike

Составители:

Рубрика:

Рис. 20. АСМ изображения образца кольцевой плазмидной ДНК pEGFP, приготовленного с

помощью ионов никеля. Изображение (а) получено полуконтактным методом в буфере,

изображение (б) получено полуконтактным методом на воздухе [2].

Для приготовления образца препарат ДНК разводят до концентрации около 1 мкг/мл в

буфере, содержащем 5мМ HEPES и 1-5 мМ NiCl

. На слюду наносят каплю раствора,

инкубируют ее 5 минут и измеряют в буфере (рис. 20а), либо промывают в воде, сушат и

измеряют на воздухе (рис. 20б).

Крепление ионами магния оказывается более слабым, и не подходит для измерения ДНК

непосредственно в буферном растворе. Однако выдержка свежесколотой слюды в воде перед

нанесением препарата способствует более сильному связыванию молекул ДНК со слюдой [12].

О силе связывания можно судить по форме молекул: релаксированная форма (рис. 21а)

говорит о наличии двумерной диффузии молекул вдоль поверхности слюды и, следовательно,

о слабом связывании, скрученность (рис. 21б) указывает на непосредственный захват молекул

при касании поверхности [12].

а б

Рис 21. Молекулы ДНК, нанесенные из одного препарата на свежесколотую слюду (а) и на

слюду, обработанную водой (б). Изображения получены полуконтактным методом на воздухе

[2].

Другим способом является модификация поверхности слюды 3-аминопропилтриэтокси

силаном (APTES) [13]. На поверхности слюды формируют пленку APTES, которая в воде

имеет положительный заряд. Для этого образцы свежеочищенной слюды помещают в

эксикатор в присутствии APTES (3-aminopropyltriethoxysilane) и DIPEA (N,N-

Disopropylethylamine) и инкубируют в атмосфере аргона в течение 2 часов при комнатной

температуре. На подготовленную таким образом подложку наносят раствор ДНК, не добавляя