Изучение биологических объектов методами атомно-силовой микроскопии. Нагорнов Ю.С. - 36 стр.

UptoLike

Составители:

Рубрика:

2.3 Исследование структуры и организации макромолекул с помощью АСМ

Метод атомно-силовой микроскопии можно применить для визуализации тетрамеризации

рибосом-инактивирующих белков второго типа (РИБ II). Результаты, полученные с помощью

АСМ, вносят вклад во многие исследования касающиеся биологии РИБ II [16-22].

Растворы токсинов были разбавлены в фосфатно-солевом буфере до концентраций 0.5-2

мкг/мл. На свежесколотую подложку слюды наносили каплю раствора объемом 10 мкл и

инкубировали в течение 1 минуты. Затем образец отмывали три раза в деонизованной воде и

обдували азотом.

Для АСМ измерений использовали полуконтактный метод. Одним из достоинств

полуконтактного метода является уменьшение латеральных сил взаимодействия между зондом

и образцом по сравнению с контактным методом АСМ. Вертикальные силы также могут быть

снижены выбором подходящих значений начальной и рабочих амплитуд колебаний зонда, а

также выбором силовой константы кантилевера.

Отмеченные достоинства полуконтактного метода АСМ важны при изучении мягких

биологических объектов, таких, например, как адсорбированные на слюду макромолекулы,

слабо закрепленные на подложке [2]. Для исследования молекул использовался сканирующий

зондовый микроскоп Solver P47H, в котором реализована схема сканирования зондом,

оборудованный приставкой для проведения измерений с атомарным разрешением. Для

экспериментов использовались кремниевые зондовые датчики серии NSG11S с двумя

кантилеверами с типичной силовой константой 5.5 Н/м и 10.5 Н/м. Начальная амплитуда

колебаний зонда лежала в диапазоне 5-15 нм, рабочая амплитуда лежала в диапазоне 1-10% от

начальной амплитуды. Для каждого зондового датчика эти значения определялись

экспериментально с помощью амплитудных кривых и качества изображений (рис.25 а и б).

а) б)