ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
соответствии с плотностью вещества в данном участке, остаток электронов фокусируется и
формирует изображение (подобно формированию изображения в оптическом микроскопе) на
фотопластинке или на фосфоресцирующем экране.
Одним из самых больших недостатков электронной микроскопии является то, что
биологические образцы необходимо подвергнуть специальной обработке. Во-первых, их
фиксируют сначала глутаровым альдегидом, а затем осмиевой кислотой, связывающей и
стабилизирующей двойной слой липидов и белков. Во-вторых, электроны обладают низкой
проникающей способностью, поэтому приходится делать сверхтонкие срезы, а для этого
образцы обезвоживают и пропитывают смолами. В-третьих, для усиления контраста образцы
обрабатывают солями тяжелых металлов, такими как осмий, уран и свинец.
Для того, чтобы получить трехмерное изображение поверхности используется
сканирующий электронный микроскоп, где используются электроны, рассеиваемые или
излучаемые поверхностью образца. Образец в данном случае фиксируют, высушивают и
покрывают тонкой пленкой тяжелого металла, а затем сканируют узким пучком электронов.
При этом оценивается количество электронов, рассеиваемых при облучении поверхности.
Полученное значение используют для контроля интенсивности второго луча, движущегося
синхронно первому и формирующему изображение на экране монитора. Разрешение метода
около 10 нм и он не применим для изучения внутриклеточных органелл. Толщина образцов,
изучаемых этим методом, определяется проникающей способностью электронов или их
энергией.
Основными и существенными недостатками всех этих методов является длительность,
сложность и высокая стоимость приготовления образца.
Атомно-силовая микроскопия, совмещенная с инвертированным оптическим микроскопом,
позволяет сочетать общепринятые оптические методики с методами сканирующей зондовой
микроскопии. Специально разработанная система освещения позволяет облучать образец
конденсором микроскопа при установленной АСМ измерительной головке [2]. Поэтому без
потери качества оптических изображений можно использовать все возможности СЗМ:
нанометровое разрешение, измерения локальной адгезии и упругости, наноманипулирование
сканирующим зондом, измерения силовых кривых и т.д. При этом все измерения проводить на
различных участках образца, оптически наводясь и выбирая последовательно качественно
различные области биологических объектов. На рис. 23 представлены светлопольное и
фазоконтрастное оптические изображения клеток фибробласта человеческого эмбриона,
полученные в процессе сканирования АСМ. Клетки были выращены и зафиксированы на
покровном стекле с последующим высушиванием.
34
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 32
- 33
- 34
- 35
- 36
- …
- следующая ›
- последняя »
