ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
Флуоресцирующие красители поглощают свет одной длины волны и излучают свет другой,
большей длины волны. Если такое вещество облучить светом, длина волны которого совпадает
с длиной волны света, поглощаемого красителем, и затем для анализа использовать фильтр,
пропускающий свет с длиной волны, соответствующей свету, излучаемому красителем,
флуоресцирующую молекулу можно выявить по свечению на темном поле. Высокая
интенсивность излучаемого света является характерной особенностью таких молекул.
Применение флуоресцирующих красителей для окраски клеток предполагает
использование специального флуоресцентного микроскопа. Такой микроскоп похож на
обычный оптический, но свет от мощного осветителя проходит через два набора фильтров
фильтрации света, полученного от образца. Первый фильтр выбран таким образом, что он
пропускает лишь свет длины волны, возбуждающей определенный флуоресцирующий
краситель; в то же время второй фильтр блокирует этот падающий свет и пропускает свет
длины волны, излучаемой красителем при его флуоресценции.
Флуоресцентная микроскопия часто используется для выявления специфических белков
или других молекул, которые становятся флуоресцирующими после ковалентного связывания
с флуоресцирующими красителями. Для этой цели обычно используют два красителя –
флуоресцеин, который дает интенсивную желто-зеленую флуоресценцию после возбуждения
светло-голубым светом, и родамин, обусловливающий темно-красную флуоресценцию после
возбуждения желто-зеленым светом. Применяя для окраски и флуоресцеин и родамин можно
получать распределение различных молекул.
Простейший способ разглядеть детали клеточной структуры – наблюдать свет,
рассеивающийся различными компонентами клетки. В темнопольном микроскопе лучи от
осветителя направляются сбоку и при этом в объектив микроскопа попадают только
рассеянные лучи. Соответственно, клетка выглядит как освещенный объект на темном поле.
Одним из основных преимуществ темнопольной микроскопии является возможность
наблюдать движение клеток в процессе деления и миграции. Клеточные движения, как
правило, совершаются очень медленно и их сложно наблюдать в реальном времени. В этом
случае используют покадровую микрокиносъемку или видеозапись. Последовательные кадры
при этом разделены во времени, но при воспроизведении записи с нормальной скоростью
картина реальных событий ускоряется.
В последние годы видеокамеры и соответствующие технологии обработки изображения
значительно увеличили возможности оптической микроскопии. Благодаря их применению
удалось преодолеть трудности, обусловленные особенностями физиологии человека. Они
состоят в том, что:
1. Глаз в обычных условиях не регистрирует очень слабый свет.
2. Глаз не способен фиксировать небольшие отличия в интенсивности света на ярком фоне.
32
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 30
- 31
- 32
- 33
- 34
- …
- следующая ›
- последняя »
