ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
2.4 Изучение клеток крови методами АСМ
Для изучения изменений формы клеток крови, строения их мембран в процессе
взаимодействия эритроцитов с вирусами успешно используется атомно-силовая микроскопия.
При исследовании биологических препаратов процесс подготовки образцов имеет решающее
значение. Для исследований на воздухе клеток крови применялись две основные схемы
приготовления образцов.
Наиболее простой способ приготовления образцов для АСМ является метод мазка. Для
исследования пригоден простой мазок крови, приготовленный на предметном стекле
стандартным для клинической лаборатории методом. Капля крови (10-20 мкл) наносится на
чистое предметное стекло и размазывается вторым стеклом. Толщина мазка убывает вдоль
направления размазывания. Препарат готов к исследованию практически сразу и не требует
дополнительных манипуляций. В световом микроскопе выбирается область, где клетки крови
расположены в один слой.
Более сложный способ приготовления образцов для исследования клеток крови является
способ нанесения клеток из суспензии. В этом случае образец представлял собой суспензию
клеток крови – эритроцитов в фосфатном буфере (рН 7,0). Перед сорбцией клетки
фиксировали добавлением параформальдегида до конечной концентрации 2% и через 2 часа
переводили в дистиллированную воду, доведя концентрацию до 10
8
штук/мл. Каплю суспензии
(5-10 мкл) наносили на предметное стекло размером 3х3 см и сушили на воздухе. Стекло
крепилось к столику микроскопа с помощью двухстороннего скотча.
В зависимости от поставленных задач клетки крови можно исследовать в воздушной среде
или в жидкости (солевом буфере). Являясь существенно менее трудоемким по сравнению с
жидкостным, воздушный режим обеспечивает высокое разрешение, позволяет наблюдать
целостность и характер повреждений мембраны. Как показано в работах [1,2], обезвоживание
практически не искажает форму эритроцитов и строение их мембраны. Именно на
высушенных образцах получали изображение спектринового скелета мембраны [1]. Сухой
режим позволяет регистрировать тонкие нарушения мембранной структуры, то время как при
работе в жидкости пространственное разрешение ограничено [3].
Для измерений на воздухе подходят как полуконтактный, так и контактный методы. Оба
режима допускают применение error mode с близкими результатами. Параллельно
полуконтактный метод позволяет получать изображения в фазовом контрасте, дающие
сведения об упругости объекта, а контактный метод дает возможность получить изображение в
режиме латеральных сил или сил трения и позволяет измерить упругость объекта в режиме
41
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 39
- 40
- 41
- 42
- 43
- …
- следующая ›
- последняя »
