Двумерная флуоресцентная микроскопия для анализа биологических образцов. Сайфитдинова А.Ф. - 53 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

СПбГУ | Санкт-Петербург

Составители: 

Рубрика: 

Двумерная флуоресцентная микроскопия для анализа биологических образцов 50
флуоресцентных белков. На основе GFP и DsRed получено множество
вариантов, обладающих значительно большей яркостью, различной скоростью
выцветания и различающихся по спектрам (Таблица 2.5).
Таблица 2.5. Некоторые варианты флуоресцирующих белков на основе GFP
Название Мутации Возб.,
нм
Излуч.,
нм
BFP Y66H 381 445
GFP (S65T) S65T 498 516
P4-3 Y66H/Y145F 381 445
alfaGFP F99S/M153T/V163A 397 475
rsGFP T2003/S65G/V68L/S72A 498 516
EBFP F64L/S65T/Y66H/Y145F 380 440
sgBFP F64L/S65C/I167T 387 450
EGFP F64L/S65T 489 508
ECFP F64L/S65T/Y66W/N146I/M153T/V163A/N212K 434 477
EYFP S65G/S72A/T203Y 514 527
Topaz S65G/S72A/T203Y/K79R/T203Y/H231L 514 527
Emerald F64L/S65T/S72A/N149K/M153T/I167T/H231L 484 508
Sapphire S72A/Y145F/T203I/H231L 395 510
W7 Y66W/N146I/M153T/V163A/N212K 433 475, 501
Свойство флуоресцирующих белков выцветать под действием облучения
светом определенной длины волны используется в исследованиях подвижности
белковых молекул в составе внутриклеточных структур методами FLIP
(фотообесцвечивание) и FRAP (восстановление флуоресценции после
фотообесцвечивания). В таких исследованиях используются варианты
флуоресцирующих белков с низкой устойчивостью к выцветанию.
Некоторые разновидности флуоресцентных белков обладают способностью
фотоактивироваться под действием света определенной длины волны. Наиболее
известны среди них фотоактивируемая мутация GFP (PA-GFP) и белок Kaede.
После непродолжительного облучения фиолетовым светом 405-413 нм,
интенсивность флуоресценции PA-GFP при облучении синим светом возрастает
в 100 раз. Фотоактивация белка Kaede имеет еще более наглядное проявление,
поскольку после 1-3 секундного облучения светом с длиной волны 405 нм
белок, который возбуждался синим (488 нм) и флуоресцировал зеленым светом
(518 нм), начинает возбуждаться светом с длиной волны 543 нм и излучать
красный свет (582 нм). Это явление получило название «фотоконверсия».
Способность флуоресцентных белков к фотоактивации также используется для
исследования динамики изменения молекулярного состава внутриклеточных
структур.
Появление флуоресцентных белков с различными спектрами возбуждения
и излучения привело к развитию метода передачи энергии флуоресцентного
резонанса (FRET). Этот метод позволяет исследовать синхронную динамику
белков в клетке, а также белок-белковые взаимодействия. Получают слитные
конструкции исследуемых белков с разными флуоресцентными белками,
причем подбирают их таким образом, чтобы флуоресценция одного белка
возбуждала флуоресценцию другого. Особенно удобны красные и
инфракрасные разновидности флуоресцентных белков, поскольку их спектры

Страницы