Составители:
Рубрика:
А.Ф.Сайфитдинова 3
Глава 1. Введение во флуоресцентную микроскопию
1.1. Флуорохромы
Флуоресцентная микроскопия представляет собой разновидность
световой микроскопии, в которой проблема увеличения контрастности
достигается путем использования особых веществ – флуорохромов (или
флуорофоров). Такие вещества способны расходовать часть энергии
поглощенного света на флуоресценцию (или излучение света определенной
длины волны при возвращении из возбужденного состояния в стабильное). При
этом испускаемый свет отличается от поглощенного длиной волны и
интенсивностью. В соответствии с правилом Стокса, длина волны испускаемого
света больше, чем длина поглощаемого, поскольку при поглощении часть
энергии рассеивается в виде тепла, а излучение света большей длины волны
требует меньше энергии. Каждый флуорохром характеризуется определенным
спектром поглощения и испускания, который определяется путем измерения
относительной интенсивности флуоресценции при определенной длине волны
(Рисунок 1.1). Наиболее интенсивная флуоресценция наблюдается тогда, когда
происходит облучение светом с длиной волны, близкой к максимуму на кривой
возбуждения. Тем не менее, перевести флуорохром в возбужденное состояние
можно облучением светом, длина волны которого не соответствует его
максимуму возбуждения. Для этого за короткий промежуток времени
флуорохром должен получить несколько импульсов облучения, так, что
суммарная энергия поглощенного света позволит ему достичь возбужденного
состояния. Такой подход в настоящее время реализован в лазерном
мультифотонном микроскопе.
Испускаемый свет также имеет максимальную интенсивность в
определенной специфичной для данного флуорохрома области спектра
(Приложение 1).
Относительная
интенсивность
% возбуждение
100 флуоресценция
495 520 λ(нм)
Рисунок 1.1. Кривые возбуждения и испускания для флуорохрома FITC.
В отличие от фосфоресценции, которая может происходить и спустя
некоторое время после окончания облучения, флуорохром излучает свет без
задержки во времени, что позволяет испускать свет максимальной
интенсивности. Тем не менее, разные флуорохромы даже при поглощении света
одинаковой интенсивности будут излучать свет разной интенсивности. В таком
случае говорят о силе флуорохрома, которая определяется квантовой
эффективностью – отношением между интенсивностью поглощаемого и
испускаемого света. Слабые флуорохромы с низкой квантовой эффективностью
испускают мало света по сравнению с уровнем поглощения. Современные
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 4
- 5
- 6
- 7
- 8
- …
- следующая ›
- последняя »
