Спектрофлуорометрический анализ. - 5 стр.

    3.      Контуры полос поглощения и флуоресценции, посторенные в шкале
            частот, приближенно симметричны относительно вертикали,
            которая проходит через точку их пересечения (правило
            вертикальной симметрии Левшина) рис.2. Нередко, однако, это
            правило не выполняется.
    Молекулярная флуоресценция находит широкое применение в физико-
химической биологии, являясь из методов качественного и количественного
анализа. В его основе лежат зависимость квантового выхода, положения
спектра, его форма, поляризация излучения от ряда структурных особенностей
флуоресцирующей молекулы и ее взаимодействие с окружением.
    Многие       молекулы    биологического     происхождения      обладают
флуоресценцией, достаточно сильной флуоресценцией обладают белки,
содержащие      флуоресцирующие      аминокислоты-    триптофан, тирозин,
фенилаланин. Около 90% интенсивности флуоресценции белков обусловлено
триптофаном. Он весьма чувствителен к полярности окружения, и анализ
флуоресценции белков дает информацию о различных процессах, среди
которых можно выделить связывание лигандов, ассоциацию белок-белок и
денатурацию. Анализ анизотропии флуоресценции белков дает информацию о
динамике взаимодействия белков с окружением.
    Флуоресценцией обладают также кофакторы, витамины и др.
    Во многих случаях флуоресцентные исследования проводят с помощью
искусственных флуорофоров- органических красителей различных классов. Их
используют в качестве меток и в качестве зондов. Флуоресцентные метки- это
обычно красители с поглощением и флуоресценцией в видимой области и с
большим квантовым выходом. Их ковалентно связывают с определенными
биологическими      молекулами.     Такие    метки     являются    основной
иммунофлуоресцентного анализа.
    В свою очередь флуоресцентные зонды- это красители, на флуоресцентные
характеристики которых сильно влияет окружение. С их помощью измеряют,
например, pH внутри клетки, мембранный потенциал, вязкость среды
ближайшего окружения и т.п.
    Структурные формулы некоторых флуорофоров, используемых в качестве
меток и зондов, приведены на рис.3.
    Следует      отметить,  что     измерение   спектров    флуоресценции-
спектрофлуорометрия- знасительно более чувствительный метод ,чем
абсорбционная       спектрофотометрия.     С     помощью        современных
спектрофлуорометров можно уверенно реагировать флуоресценцию вещества с
                       моль
концентрацией 10 −11        .
                        л




                                     5