Практикум по биологии почв. Зенова Г.М - 104 стр.

   Определение потенциальной активности денитрификации в почве.
   Навеску воздушно-сухой почвы (5 г) помещают в пенициллиновый флакон
объемом 15 мл, увлажняют до 60% от полевой влагоемкости и инкубируют при
28° 2—3 суток. После этого вносят глюкозу (2,5 мг/г), нитрат калия (0,2 мг/г),
добавляют 5 мл стерильной дистиллированной воды, флаконы закрывают рези-
новыми пробками, которые фиксируют зажимами. Воздух вытесняют аргоном
и вводят 1 мл ацетилена. После этого флаконы тщательно встряхивают,
переворачивают вверх дном и инкубируют при 28° 1—24 ч. Анализ газов
проводят на газовом хроматографе М-3700 с детектором по теплопроводности.
Длина колонки — 3,5 м, диаметр — 3 мм, наполнитель Раrарак-Q, ток питания
катарометра — 148 мА, температура испарителя термостата — 30°. Расход газа
носителя (гелия) — 30 мл/мин. Активность денитрификации выражают в
миллиграммах азота на 1 кг почвы за час (Методы почвенной микробиологии и
биохимии, 1991).
  Методы определения в почве активности ферментов. Наиболее простыми
из них по выполнению являются методы определения активности дегидрогеназ
и инвертазы (Методы почвенной микробиологии и биохимии, 1991).
  Для определения активности дегидрогеназ в почве в качестве акцептора
водорода применяют бесцветные соли тетразолия (2, 3, 5-трифенил-тетразолий
хлористый,   ТТХ),   которые   восстанавливаются    в   красные   соединения
формазанов (трифенил-формазан, ТФФ). Навеску почвы 1 г помещают в 50-
миллилитровую вакуумную колбу с притертыми стеклянными пробками, до-
бавляют 10 мг углекислого кальция и тщательно смешивают. Для определения
дегидрогеназ лучше использовать свежие образцы почвы, так как при
высушивании образцов почвы активность де-гидрогеназы падает до 50—80%
(для дерново-подзолистой почвы). Затем добавляют 1 мл 1%-ного раствора
ТТХ. Определение проводят в анаэробных условиях, для этого воздух из колбы
эвакуируют при разрежении 10—12 мм рт. ст. в течение 2—3 мин. Колбы
осторожно встряхивают и ставят в термостат при 38° на 24 ч. Контролем
служит стерилизованная почва и субстраты без почвы. После окончания

                                     103