Практикум по биологии почв. Зенова Г.М - 105 стр.

инкубации в колбы добавляют по 25 мл этилового спирта и встряхивают в
течение 5 мин. Содержимое колбы фильтруют и полученный раствор ТФФ
анализируют на фотоэлектроколориметре, используя кюветы шириной 5 мм и
синий светофильтр с длиной волны 500—600 нм. Количество формазана в мг
рассчитывают по стандартной кривой. Для составления калибровочной кривой
готовят стандартный раствор формазана в этиловом спирте (0,1 мг в 1 мл),
затем в мерные колбы на 25 мл берут соответствующее количество
стандартного раствора, содержащее от 0,1 до 1,0 мг формазана, этанолом дово-
дят до метки и фотоколориметрируют согласно вышеописанному способу.
Активность дегидрогеназ выражают в миллиграммах ТФФ на 10 г почвы за
сутки. Ошибка определения — до 8%.
  Фотоколориметрический      метод   определения     активности   инвертазы
заключается в следующем. В колбу емкостью 50 мл помещают 5 г почвы,
добавляют 10 мл 5%-ного раствора сахарозы, 10 мл ацетатного буфера (рН 4,7)
и 5—6 капель толуола. Колбы закрывают пробками, встряхивают и помещают в
термостат при температуре 30° на 24 ч, периодически встряхивая их. Контроль
— стерилизованная почва (3 ч при 180°) и чистый субстрат.
   После инкубации содержимое колб фильтруют в 100-миллилитровые
мерные колбы. Из фильтра берут 6 мл в большие пробирки, добавляют 3 мг
сегнетовой соли и 3 мл раствора сернокислой меди, хорошо перемешивают и
кипятят на водяной бане в течение 10 мин. Затем пробирки с раствором
охлаждают в холодной        воде, содержимое переносят в пробирки         и
центрифугируют в течение 5—7 мин при 3000 об/мин. Прозрачный
центрифугат колориметрируют на фотоэлектроколориметре (светофильтр —
630 нм), кюветы шириной 1 см. Количество глюкозы рассчитывают по
предварительно     составленным      калибровочным     кривым.    Исходный
стандартный раствор — 6 мг глюкозы в 1 мл. Активность инвертазы выражают
в миллиграммах глюкозы на 1 г почвы за сутки. Ошибка определения — до
5%.
   Весьма плодотворной является оценка обогащенности генетических

                                     104