Микробиология с основами вирусологии. Алёхина Г.П. - 31 стр.

      Определение числа бактерий. В популяции бактерий не все клетки жиз-
неспособны. Живыми считаются те клетки, которые могут образовывать коло-
нии на (или в) агаризованной среде либо суспензию в питательном растворе.
Эти жизнеспособные клетки выявляют специальными методами, предназна-
ченными для определения числа живых клеток. В общее же число клеток вклю-
чают все видимые или иным способом выявленные клетки; сюда, следователь-
но, входят также мертвые или поврежденные клетки.
      Общее число клеток.
1.    Самым распространенным методом определения общего числа клеток
      служит их подсчет под микроскопом в тонком слое с помощью «счетной
      камеры» (например, по Нейбауэру, Тома или Петрову-Хаузе-ру). Если
      толщина слоя 0,02 мм, а сторона квадрата 0,05 мм (объем 5-10 ~ 8 см3), то
      для того, чтобы определить число клеток в 1 мл, следует найденное их
      число умножить на 2-107.
2.    Значительно облегчает работу применение электронного счетчика («счет-
      чика Каултера»). Действие его основано на снижении проводимости рас-
      твора электролитов при прохождении одной бактерии через узкое отвер-
      стие.
3.    Если на 1 мл приходится менее 106 клеток, для определения их числа
      пригоден метод мембранных фильтров. Морскую, прудовую или пить-
      евую воду пропускают через мембранный фильтр, а затем этот фильтр
      сушат, окрашивают, просветляют и производят подсчет клеток под мик-
      роскопом.
       Число живых клеток.
      Обычно подсчитывают число колоний, образуемых жизнеспособными
клетками в благоприятных для роста условиях. Если пользуются чашечным ме-
тодом Коха, то равные доли соответственно разбавленной гомогенной суспен-
зии клеток смешивают с расплавленной агаризованной средой (40-45°С) и вы-
ливают на чашки Петри. Можно также размазать суспензию по поверхности
агара в чашке Петри с помощью (треугольного) шпателя Дригальского или же
осадить клетки после фильтрования на агаризованную срду или на картонные
диски с питательной средой. Во всех случаях после надлежащей инкубации
подсчитывают число колоний. Эти методы непригодны для подсчета клеток
разных видов микроорганизмов из смешанных популяций.

      Работа 5 Определение бактериальной массы.
      Выбор метода для определения бактериальной массы зависит от того, с
какой целью это определение производится. Для оценки урожая обычно взве-
шивают сырые или сухие отцентрифугированные клетки. При определении ин-
тенсивности обмена или ферментативной активности исходят из содержания в
клетках белка или азота. Часто выбор метода диктуется такими соображениями,
как простота или быстрота работы. В повседневной практике предпочтение от-
дается не прямым, а косвенным методам (после соответствующей калибровки).



                                                                             31