ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
Адсорбент (окись алюминия) на стеклянной пластин-
ке выравнивается стеклянной палочкой. Слой адсорбента
должен быть гладким, без пор и шероховатостей. На тонкий
слой адсорбента на стеклянной пластинке, наносятся рас-
творы испытуемого вещества при помощи капилляра в виде
точек на стартовую линию, отстоящую от края пластины на
1см (расстояние между точками с пробами веществ не
меньше 1,5см). Вещества наносят осторожно, чтобы не на-
рушить слой адсорбента. Пластинку погружают в раствори-
тель, находящийся в чашке Петри, под углом 10-20 град, не
более чем 0.5см. Растворитель, продвигаясь по адсорбенту,
разделяет смесь вещества за 30-40 мин. Когда растворитель
продвинется на 9-10 см, пластину вынимают из чашки, от-
мечают линию фронта, сушат на воздухе 5-10 мин. Затем ее
опрыскивают диазотированной солью сульфаниловой ки-
слоты в 10% растворе соды. Опрыскивание производят ос-
торожно из пульверизатора с помощью лаборанта. После
опрыскивания появляется окрашивание в виде нескольких
пятен. Исследуемые вещества проявляются в виде отдель-
ных пятен между линией старта (место нанесения вещества)
и линией финиша (крайняя верхняя граница, до которой про-
двинулся растворитель.)
Положение исследуемых ве-
ществ, находящихся в виде ок-
рашенных пятен между линией
старта и линией фронта, харак-
теризуется физической кон-
стантой R
f
. Величину R
f
(коэф-
фициент удерживания или рас-
пределения) вычисляют по
уравнению: R
f
= в/а,
где в - это расстояние от стартовой линии до центра
пятна, а - расстояние от стартовой линии до финиша. Вели-
чина R
f
характерна для соединения, обнаружение которого
ведется в строго определенных условиях и зависит от спосо-
ба работы адсорбента, растворителя количества нанесенного
вещества, длины пробега растворителя. Тонкослойная хро-
матография - очень удобный способ для разделения неболь-
ших количеств многокомпонентных смесей веществ. Пре-
имущества этого метода - быстрота и большая чувствитель-
ность (0,1-0,05 г вещества).
А, Б - чистые вещества («свидетели»)
С - смесь веществ
Задание: Нарисовать хроматограмму, рассчитать R
f
каждого пятна и сделать вывод о компонентах смеси.
3.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ
РАДИАЛЬНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Реактивы и посуда:
Смесь аминокислот
Чистые аминокислоты (аланин, аспарагиновая кислота, ва-
лин)
Растворитель (смесь бутанола, уксусной кислоты, воды -
БУВ) 4:1:5
Проявитель (0,5 % раствор нингидрина в ацетоне)
Хроматографическая бумага
Стеклянные капилляры 3 шт.
Чашки Петри 2 шт.
Простой карандаш
!!! – работу выполнять аккуратно. Бумажную хромато-
грамму держать руками только за края. Пользоваться
только простым карандашом.
Хроматографическая камера состоит из двух чашек
Петри равного диаметра. В нижнюю из них помещают рас-
творитель - смесь БУВ (4:1:5). Из куска специальной фильт-
чина Rf характерна для соединения, обнаружение которого
Адсорбент (окись алюминия) на стеклянной пластин- ведется в строго определенных условиях и зависит от спосо-
ке выравнивается стеклянной палочкой. Слой адсорбента ба работы адсорбента, растворителя количества нанесенного
должен быть гладким, без пор и шероховатостей. На тонкий вещества, длины пробега растворителя. Тонкослойная хро-
слой адсорбента на стеклянной пластинке, наносятся рас- матография - очень удобный способ для разделения неболь-
творы испытуемого вещества при помощи капилляра в виде ших количеств многокомпонентных смесей веществ. Пре-
точек на стартовую линию, отстоящую от края пластины на имущества этого метода - быстрота и большая чувствитель-
1см (расстояние между точками с пробами веществ не ность (0,1-0,05 г вещества).
меньше 1,5см). Вещества наносят осторожно, чтобы не на- А, Б - чистые вещества («свидетели»)
рушить слой адсорбента. Пластинку погружают в раствори- С - смесь веществ
тель, находящийся в чашке Петри, под углом 10-20 град, не Задание: Нарисовать хроматограмму, рассчитать Rf
более чем 0.5см. Растворитель, продвигаясь по адсорбенту, каждого пятна и сделать вывод о компонентах смеси.
разделяет смесь вещества за 30-40 мин. Когда растворитель
продвинется на 9-10 см, пластину вынимают из чашки, от- 3.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ
мечают линию фронта, сушат на воздухе 5-10 мин. Затем ее РАДИАЛЬНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
опрыскивают диазотированной солью сульфаниловой ки-
слоты в 10% растворе соды. Опрыскивание производят ос- Реактивы и посуда:
торожно из пульверизатора с помощью лаборанта. После Смесь аминокислот
опрыскивания появляется окрашивание в виде нескольких Чистые аминокислоты (аланин, аспарагиновая кислота, ва-
пятен. Исследуемые вещества проявляются в виде отдель- лин)
ных пятен между линией старта (место нанесения вещества) Растворитель (смесь бутанола, уксусной кислоты, воды -
и линией финиша (крайняя верхняя граница, до которой про- БУВ) 4:1:5
двинулся растворитель.) Проявитель (0,5 % раствор нингидрина в ацетоне)
Положение исследуемых ве- Хроматографическая бумага
ществ, находящихся в виде ок- Стеклянные капилляры 3 шт.
рашенных пятен между линией Чашки Петри 2 шт.
старта и линией фронта, харак- Простой карандаш
теризуется физической кон-
стантой Rf. Величину Rf (коэф- !!! – работу выполнять аккуратно. Бумажную хромато-
фициент удерживания или рас- грамму держать руками только за края. Пользоваться
пределения) вычисляют по только простым карандашом.
уравнению: Rf = в/а, Хроматографическая камера состоит из двух чашек
где в - это расстояние от стартовой линии до центра Петри равного диаметра. В нижнюю из них помещают рас-
пятна, а - расстояние от стартовой линии до финиша. Вели- творитель - смесь БУВ (4:1:5). Из куска специальной фильт-
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 18
- 19
- 20
- 21
- 22
- …
- следующая ›
- последняя »
