Основы экологического мониторинга - 84 стр.

в каждый. После каждого погружения дают возможность раствору си-                                                                                            3.7 Колориметрическое определение пигментов
ни стечь в тот же бюкс, из которого были вынуты корни.                                                                                                          в растительном материале
      4. Уменьшение концентрации сини определяют путем сравнения
найденной для каждого бюкса концентрации с исходной, т. е. с 0,0003
                                                                                                                                                             Одним из наиболее точных и быстрых способов количественной
н раствором МС (112 мг МС/л; молекулярная масса метиленовой сини
                                                                                                                                                       оценки пигментов является определение их концентрации на фото-
с тремя молекулами воды равна 373,68 г), предварительно разбавлен-
                                                                                                                                                       электроколориметре, который позволяет без калибровочных кривых
ным, как и раствор МС в бюксах, в 10 раз. Разбавление МС перед ус-
                                                                                                                                                       на основании экспериментально полученных данных по оптической
тановлением ее концентрации повышает точность определения.
                                                                                                                                                       плотности известных для каждого пигмента величин молярного или
      5. По учету количества поглощенной сини в первых двух бюксах
                                                                                                                                                       удельного коэффициента поглощения при определённой длине волны
определяют общую адсорбирующую поверхность корней. МС, погло-
                                                                                                                                                       рассчитать концентрацию пигментов.
щенная в третьем бюксе, характеризует рабочую адсорбирующую по-
                                                                                                                                                             Содержание хлорофиллов a и b и каротиноидов можно опреде-
верхность. Разница между общей и рабочей адсорбирующей поверх-
                                                                                                                                                       лить в исходной вытяжке пигментов без предварительного их разделе-
ностями дает представление о масштабе недеятельной поверхности
                                                                                                                                                       ния. Для этого измеряют оптическую плотность экстракта на фото-
корней. Частное от деления величин общей и рабочей поверхности на
                                                                                                                                                       электроколориметре при двух длинах волн, соответствующих макси-
объем корней (более грубо на их сырую массу в граммах) дает пред-
                                                                                                                                                       мумам поглощения хлорофиллов а и b в красной области спектра при
ставление о соответствующих величинах удельной адсорбирующей
                                                                                                                                                       длине волны адсорбционного максимума каротиноидов. Предвари-
поверхности корней.
                                                                                                                                                       тельно необходимо установить положение максимумов и разбавить
      6. Окрашенные корни после извлечения из третьего бюкса про-
                                                                                                                                                       экстракт до такой степени, чтобы получить величину оптической
мывают водой и помещают в бюкс с СаС12. МС, несущая положитель-
                                                                                                                                                       плотности (D) в пределах от 0,1 до 0,8 при λmax 665.
ный заряд, в результате обменной адсорбции ионов Са2+ выделяется
из корней и окрашивает раствор в синий цвет.                                                                                                                Цель работы – провести сравнительное определение содержа-
      7. Результаты анализа записывают в таблицу 3.4.                                                                                                  ния пигментов в листьях различных растений.
Таблица 3.4 – Определение адсорбирующей поверхности корней                                                                                                  Оборудование, материалы и реактивы:
                                            Количество МС                               Адсорбирующая поверхность, м                    2                   – фотоэлектроколориметр;
                    Объем раствора МС




                                              в бюксе, мг                                                 Удельная                                          – центрифуга;
                       в бюксе, мл




                                                                                                                                                            – торсионные весы;
                                                                                                       Недеятельная
                                        До погружения
          № бюкса
Вариант




                                                                       Поглощенной
                                                        жения корней




                                                                                                                                        Недеятельная
                                                        После погру-




                                                                                                                                                            – фарфоровая ступка с пестиком;
                                                                                             Рабочая
                                                                                     Общая




                                                                                                                              Рабочая
                                            корней




                                                                                                                      Общая




                                                                                                                                                            – пробирки на 10 мл с притертой пробкой;
                                                                                                                                                            – спирт 96%.
                                                                                                                                                             Ход работы
                                                                                                                                                             1. Приготовление вытяжки пигментов. Для этого листья одного
     8. Сделать вывод и составить проект по оптимизации погло-                                                                                         яруса необходимо измельчить, отбросить черешки и крупные жилки.
щающей поверхности корневой массы растений с целью улучшения их                                                                                        Взвесить 40 мг материала и перенести в пробирки. Добавить 10 мл
минерального питания.                                                                                                                                  96% спирта. Поместить пробирки с содержимым в темное место на
                                                                                                                                                       двое суток до полного выхода пигментов из навески в раствор.
                                                                                                                                                             2. Оптическую плотность экстракта определяют на фотоэлек-
                                                                                                                                                       троколориметре при следующих длинах волн (нм):

                                                                               167                                                                                                    168