Медицинская биохимия. Бескровная Е.В - 25 стр.

а иногда и специальной квалификации аналитика наряду с доста-                 Раствор сравнения готовится следующим образом: в пробир-
точно высокой стоимостью определения делает этот метод достоя-          ку наливают 40 мкл дистиллированной воды и 2,0 мл рабочего рас-
нием научно-исследовательских учреждений и значительно огра-            твора.
ничивает его использование в клинической лаборатории.                         Приготовленные растворы тщательно перемешивают, избегая
      Среди колориметрических методов определения концентра-            пенообразования, и оставляют инкубировать в течение 30 минут
ции общего белка наиболее распространенным считается биурето-           при температуре 18−25°С.
вый метод, основанный на так называемой «цветной биуретовой                   Оптическая плотность растворов измеряется при помощи
реакции», которая происходит по схеме:                                  спектрофотометра СФ-56 в кюветах с длиной оптического пути 1
       Белок + Сu+ + ОН– → комплекс фиолетового цвета.                  см.
      Каждый ион меди образует комплекс с 5 или 6 пептидными
связями.                                                                      Порядок выполнения работы
      Определение концентрации вещества в окрашенном растворе
                                                                              1. Ознакомиться с принципом работы спектрофотометра СФ-
по оптической плотности можно осуществить при помощи по-
                                                                        56.
строения калибровочной кривой. В этом случае готовят несколько
                                                                               2. Приготовить растворы белка с концентрацией 50 г⁄л, 60
растворов определяемого вещества с известными концентрациями
                                                                        г⁄л, 70 г⁄л, 80 г⁄л, 90 г⁄л, анализируемый раствор и раствор сравне-
и измеряют оптические плотности этих растворов. Полученные
                                                                        ния.
результаты представляют графически (по оси абсцисс откладывают
                                                                               3. Измерить оптические плотности растворов с различной
значения концентрации белка, а по оси ординат – соответствую-
                                                                        концентрацией белка, анализируемого растворов относительно рас-
щие значения оптической плотности). Определив оптическую
                                                                        твора сравнения в кювете с оптической длиной 1 см при длине вол-
плотность анализируемого раствора, находят по калибровочной
                                                                        ны 540 нм.
кривой содержание в нем вещества.
                                                                               4. Построить калибровочную кривую: зависимость оптиче-
                                                                        ской плотности от концентрации. Аппроксимировать калибровоч-
      Методика измерений
                                                                        ную кривую зависимостью вида A=kc, где A – оптическая плот-
       В настоящей работе используется плазма крови, полученная         ность вещества, k – постоянный коэффициент, c – концентрация
центрифугированием цельной гепаринизированной венозной крови            вещества.
в течение 15 минут. Для спектрофотометрического анализа необ-                  5. Определить концентрацию общего белка в анализируемом
ходимо приготовить анализируемый, калибровочные растворы и              растворе по калибровочной кривой. Сравнить с физиологической
раствор сравнения.                                                      нормой.
       Для приготовления анализируемого раствора в пробирку с
помощью дозирующих диспенсеров наливают 40 мкл плазмы и                       Рекомендуемый библиографический список
2,0 мл рабочего раствора.
                                                                              1. Практикум по биохимии. Омск: ОГМА, 2001.
       Для приготовления растворов с концентрациями 50 г⁄л, 60 г⁄л,
                                                                              2. Справочник по функциональной диагностике / Под ред.
70 г⁄л, 80 г⁄л и 90 г⁄л в пробирки наливают 40 мкл раствора с извест-
                                                                        И.А. Кассирского. М.: Медицина, 1980.
ной концентрацией альбумина и 2,40 мл, 2,00 мл, 1,71 мл, 1,50 мл и
1,33 мл рабочего раствора, соответственно.


                                 49                                                                     50