Медицинская биохимия. Бескровная Е.В - 34 стр.

ет комплекс красного цвета. По оптической плотности полученного           Для приготовления раствора №1 (для определения общего
раствора определяют концентрацию общего билирубина, а по раз-       билирубина) в пробирку с помощью дозирующих диспенсеров на-
нице между содержанием общего и конъюгированного билирубина         ливают 0,25 мл сыворотки крови, 2,0 мл кофеинового реактива и
(определяемого по той же реакции, но без добавления кофеина) ус-    0,25 мл диазореактива.
танавливают концентрацию свободного билирубина.                           Для приготовления раствора №2 (для определения связанного
      Этот метод удобен тем, что на одной и той же реагентной ба-   билирубина) в пробирку наливают 0,25 мл сыворотки крови, 2,0 мл
зе можно проводить определение как прямого, так и свободного        10 %-го раствора NaCl и 0,25 мл диазореактива.
билирубина.                                                               Раствор сравнения получается при смешивании в пробирке
      Для определения концентрации билирубина измеряют спек-        0,25 мл сыворотки крови и 2,25 мл 10 %-го раствора NaCl.
тры поглощения анализируемого раствора и раствора с известной             Подготовленные растворы осторожно перемешивают, избегая
концентрацией.                                                      пенообразования, и оставляют инкубировать при температуре 20–
      Основным уравнением количественного спектрофотометри-         25°С. Время инкубации для определения концентрации связанного
ческого анализа является уравнение Фирорда:                         билирубина 10 мин., для общего билирубина – 20 мин.
                          A л = е л cl ,                   (1)            Оптическая плотность растворов измеряется при помощи
                                                                    спектрофотометра Spectro 2000 RS в кюветах с длиной оптического
где A – оптическая плотность вещества при длине волны λ; ελ –
      λ
                                                                    пути 1 см.
показатель поглощения соответствующий длине волны λ; c – кон-
центрация исследуемого вещества; l – толщина светопоглощающе-            Порядок выполнения работы
го слоя.
       Решение уравнений Фирорда для анализируемого и калибро-            1. Ознакомиться с принципом работы спектрофотометра
вочного растворов:                                                  Spectro 2000 RS.
                                                                          2. Приготовить анализируемые, калибровочный растворы и
                           A л = е л cl ,                    (2)    раствор сравнения.
                           Aкл = е л cк l ,                  (3)          3. Измерить оптические плотности анализируемых и калиб-
                                                                    ровочного растворов относительно раствора сравнения в кюветах с
где А л – оптическая плотность анализируемого раствора; Акл – оп-   оптической длиной 1 см при длине волны λ=540 нм.
тическая плотность раствора с известной концентрацией вещества;           4. Вычислить концентрации связанного и общего билирубина
ск – концентрация в калибровочном растворе, позволяющая опре-       в сыворотке крови по формуле (4), где cк=51 мкмоль/л. Сравнить
делить концентрацию анализируемого раствора:                        полученные значения с физиологической нормой.
                                 Aл .                        (4)         Рекомендуемый библиографический список
                           c=       c
                                 Aкл к
                                                                          1. Практикум по биохимии. Омск: ОГМА, 2001.
                                                                          2. Справочник по функциональной диагностике / Под ред.
     Методика измерений                                             И.А. Кассирского. М.: Изд-во «Медицина», 1980.
     В настоящей работе используют сыворотку негепаринизиро-
ванной венозной крови.

                                 67                                                               68