Медицинская биохимия. Бескровная Е.В - 33 стр.

                               COOH        COOH                                     Результатом избыточного накопления билирубина в крови
                               │           │                                  (более 35÷43 мкмоль/л) и его отложения в тканях является желтое
            CH2                CH2         CH2                          CH2   окрашивание кожи, слизистых оболочек. Желтуха является харак-
                               │           │
 H 2C
                                                                              терным симптомом заболеваний печени, желчных путей, а также
            CH     H 2C        CH2         CH2        CH2    H 2C       CH
                                                                              болезней, протекающих с массивным гемолизом.
                                                                                    В настоящее время под свободным билирубином принято по-
 HO
                                                                              нимать неконъюгированный с глюкуроновой кислотой билирубин.
                                                                        OH
                                                                              Билирубин-глюкурониды именуют связанным билирубином. В
        N         CH      NH         CH2         NH         CH      N         клинической лабораторной практике нашло применение количест-
            Рис. 1. Структурная формула билирубина                            венное определение обеих фракций: как связанного билирубина,
                                                                              так и общего билирубина (суммарного содержания свободного би-
      Билирубин образуется в результате сложного химического                  лирубина и билирубинглюкуронидов).
превращения продуктов распада гемоглобина – биливердина и вер-                      Нормальное содержание общего билирубина 7,5÷20,5
доглобина. При распаде 1 г гемоглобина образуется 34 мг билиру-               мкмоль/л, связанного билирубина – 1,6÷6,2 мкмоль/л.
бина. При высоких концентрациях билирубин обладает выражен-
ной токсичностью, так как он легко проникает через плазматиче-                     Методы определения
скую мембрану нервных клеток, нарушает процессы окислительно-
                                                                                    Для определения содержания билирубина в сыворотке (плаз-
го фосфорилирования и приводит к повреждениям нервной систе-
                                                                              ме) крови используют химические и физико-химические методы
мы.
                                                                              исследования: колориметрические, спектрофотометрические, хро-
      Свободный билирубин – нерастворимое в воде вещество, ко-
                                                                              матографические. Большинство методов базируется на реакции би-
торое переносится в плазме крови альбумином. Установлено, что
                                                                              лирубина с диазофенилсульфоновой кислотой, в ходе которой в
каждая молекула альбумина реагирует с 2–3 молекулами билиру-
                                                                              щелочной среде образуется синяя, а в кислой – розовая окраска.
бина, причем одна из молекул связана с альбумином более прочно,
                                                                                    Метод Ван ден Берга заключается в использовании диазоти-
чем остальные. В физиологических условиях 1 г альбумина содер-
                                                                              рования диазофенилсульфоновой кислотой двух дипирроловых
жит в себе 17 мг билирубина. Комплекс альбумина и билирубина
                                                                              производных билирубина, образующихся вследствие разрыва тет-
транспортируется током крови в печень, где диссоциирует на аль-
                                                                              рапирроловой цепи молекулы билирубина при предварительной
бумин и свободный билирубин на поверхности плазматической
                                                                              инкубации образца с соляной кислотой. Этот метод позволяет по
мембраны. Свободный билирубин ассоциирует с липидами плазма-
                                                                              скорости реакции определять различные фракции билирубина.
тической мембраны и перемещается в клетку при участии двух бел-
                                                                                    Из модифицированных методов, использующих диазореак-
ков переносчиков – лигандина и протеина Z. В клетках печени под
                                                                              цию, наибольшее распространение в клинико-лабораторной прак-
влиянием фермента глюкуронилтрансферазы билирубин образует
                                                                              тике приобрел метод Ендрашика-Грофа, в котором в качестве аксе-
билирубинмоно- и билирубиндиглюкурониды, при этом присущая
                                                                              лераторов (ускорителей) протекания реакции со свободным били-
билирубину токсичность в значительной мере теряется. Эти произ-
                                                                              рубином используются кофеин и бензоат натрия. Метод заключает-
водные достаточно хорошо растворимы в воде и выводятся из пе-
                                                                              ся в том, что при добавлении к сыворотке кофеинового реактива
чени по желчевыводящим путям.
                                                                              свободный билирубин переходит в растворимое диссоциированное
                                                                              состояние и, вступая в реакцию со смесью диазореактивов, образу-

                                     65                                                                     66