Медицинская биохимия. Бескровная Е.В - 31 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ОмГУ | Омск

Составители: 

Рубрика: 

61
%100
04,2
][
1
АБ
Б
c
AA
A
HbA
+
=
, (1)
где A
А
– оптическая плотность фракции А; A
Б
– оптическая плот-
ность фракции Б; 2,04 – коэффициент пересчета, зависящий от
объема фракций А и Б.
Методика измерений
Для количественного анализа гликозилированного гемогло-
бина используется венозная кровь.
В пластиковую пробирку поместить 0,05 мл (одна капля) рас-
твора 1 и 0,5 мл крови. Перемешать, отобрать 0,02 мл, перенести в
пробирку, содержащую 0,2 мл раствора 2 и перемешать
в течение
1–2 мин.
Нагреть водопроводную воду до температуры 25
0
C в термо-
стате. Поместить в термостат колбу с буферным раствором 1 и вы-
держать в течение 15 мин при периодическом перемешивании.
Промаркировать две стеклянные пробирки буквами А и Б.
Установить пробирки в штатив.
Подготовка микроколонки к анализу: снять верхнюю крыш-
ку, затем нижний колпачок и слить консервирующий раствор.
Вставить микроколонку в пробирку
А и выдержать в течение 15–20
мин при комнатной температуре.
В микроколонку внести по 5,0 мл буферного раствора №1 и
дать жидкости стечь. После полного стекания жидкости в микроко-
лонку нанести на верхний фильтр 0,1 мл исследуемого гемолизата,
выдержать 1–2 мин, затем в микроколонку внести 0,1 мл буферного
раствора № 1 и выдержать 3–5 мин. Затем внести в
микроколонку
10,0 мл буферного раствора № 1 и дать жидкости стечь.
Микроколонку переместить таким образом, чтобы она нахо-
дилась в пробирке Б. В микроколонку внести 5,0 мл буферного рас-
твора № 2 и дать жидкости стечь. Затем извлечь микроколонку из
пробирки.
Измерение оптической плотности фракций А и Б производит-
ся с помощью спектрофотометра СФ
–56.
62
Порядок выполнения работы
1. Подготовить образцы крови для анализа.
2. Осуществить хроматографическое разделение фракций А и
Б.
3. Разделенные фракции А и Б поместить в кварцевые кюве-
ты, затем определить оптическую плотность данных растворов от-
носительно раствора сравнения (дистиллированная вода) при 414
нм.
4. По формуле (1) вычислить содержание гликозилированно-
го гемоглобина в анализируемом образце
крови. Используя ниже-
следующую таблицу соответствия, определить уровень гликемии
(гипогликемия, нормальный уровень, гипергликемия).
Среднесуточная
концентрация глюкозы,
ммоль/л
Содержание
гликозилированного
гемоглобина, %
0,8 3,0
1,7 3,5
2,6 4,0
3,6 4,5
4,4 5,0
5,4 5,5
6,3 6,0
7,2 6,6
8,2 7,0
9,1 7,5
10,0 8,0
11,0 8,5
11,9 9,0
12,8 9,5
13,7 10,0
14,7 10,5
15,6 11,0 
                                      AБ                                 Порядок выполнения работы
                   [ HbA1c ] =                100% ,         (1)
                                 AБ + 2,04 AА                            1. Подготовить образцы крови для анализа.
где AА – оптическая плотность фракции А; AБ – оптическая плот-           2. Осуществить хроматографическое разделение фракций А и
ность фракции Б; 2,04 – коэффициент пересчета, зависящий от         Б.
объема фракций А и Б.                                                     3. Разделенные фракции А и Б поместить в кварцевые кюве-
                                                                    ты, затем определить оптическую плотность данных растворов от-
     Методика измерений                                             носительно раствора сравнения (дистиллированная вода) при 414
                                                                    нм.
      Для количественного анализа гликозилированного гемогло-
                                                                          4. По формуле (1) вычислить содержание гликозилированно-
бина используется венозная кровь.
                                                                    го гемоглобина в анализируемом образце крови. Используя ниже-
      В пластиковую пробирку поместить 0,05 мл (одна капля) рас-
                                                                    следующую таблицу соответствия, определить уровень гликемии
твора 1 и 0,5 мл крови. Перемешать, отобрать 0,02 мл, перенести в
                                                                    (гипогликемия, нормальный уровень, гипергликемия).
пробирку, содержащую 0,2 мл раствора 2 и перемешать в течение
1–2 мин.
      Нагреть водопроводную воду до температуры 250C в термо-               Среднесуточная                  Содержание
стате. Поместить в термостат колбу с буферным раствором 1 и вы-          концентрация глюкозы,           гликозилированного
держать в течение 15 мин при периодическом перемешивании.                       ммоль/л                    гемоглобина, %
      Промаркировать две стеклянные пробирки буквами А и Б.                       0,8                            3,0
Установить пробирки в штатив.                                                     1,7                            3,5
      Подготовка микроколонки к анализу: снять верхнюю крыш-                      2,6                            4,0
ку, затем нижний колпачок и слить консервирующий раствор.                         3,6                            4,5
Вставить микроколонку в пробирку А и выдержать в течение 15–20
                                                                                  4,4                            5,0
мин при комнатной температуре.
      В микроколонку внести по 5,0 мл буферного раствора №1 и                     5,4                            5,5
дать жидкости стечь. После полного стекания жидкости в микроко-                   6,3                            6,0
лонку нанести на верхний фильтр 0,1 мл исследуемого гемолизата,                   7,2                            6,6
выдержать 1–2 мин, затем в микроколонку внести 0,1 мл буферного                   8,2                            7,0
раствора № 1 и выдержать 3–5 мин. Затем внести в микроколонку                     9,1                            7,5
10,0 мл буферного раствора № 1 и дать жидкости стечь.                            10,0                            8,0
      Микроколонку переместить таким образом, чтобы она нахо-                    11,0                            8,5
дилась в пробирке Б. В микроколонку внести 5,0 мл буферного рас-
                                                                                 11,9                            9,0
твора № 2 и дать жидкости стечь. Затем извлечь микроколонку из
пробирки.                                                                        12,8                            9,5
      Измерение оптической плотности фракций А и Б производит-                   13,7                           10,0
ся с помощью спектрофотометра СФ–56.                                             14,7                           10,5
                                                                                 15,6                           11,0


                                    61                                                            62

Страницы