ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
61
%100
04,2
][
1
АБ
Б
c
AA
A
HbA
+
=
, (1)
где A
А
– оптическая плотность фракции А; A
Б
– оптическая плот-
ность фракции Б; 2,04 – коэффициент пересчета, зависящий от
объема фракций А и Б.
Методика измерений
Для количественного анализа гликозилированного гемогло-
бина используется венозная кровь.
В пластиковую пробирку поместить 0,05 мл (одна капля) рас-
твора 1 и 0,5 мл крови. Перемешать, отобрать 0,02 мл, перенести в
пробирку, содержащую 0,2 мл раствора 2 и перемешать
в течение
1–2 мин.
Нагреть водопроводную воду до температуры 25
0
C в термо-
стате. Поместить в термостат колбу с буферным раствором 1 и вы-
держать в течение 15 мин при периодическом перемешивании.
Промаркировать две стеклянные пробирки буквами А и Б.
Установить пробирки в штатив.
Подготовка микроколонки к анализу: снять верхнюю крыш-
ку, затем нижний колпачок и слить консервирующий раствор.
Вставить микроколонку в пробирку
А и выдержать в течение 15–20
мин при комнатной температуре.
В микроколонку внести по 5,0 мл буферного раствора №1 и
дать жидкости стечь. После полного стекания жидкости в микроко-
лонку нанести на верхний фильтр 0,1 мл исследуемого гемолизата,
выдержать 1–2 мин, затем в микроколонку внести 0,1 мл буферного
раствора № 1 и выдержать 3–5 мин. Затем внести в
микроколонку
10,0 мл буферного раствора № 1 и дать жидкости стечь.
Микроколонку переместить таким образом, чтобы она нахо-
дилась в пробирке Б. В микроколонку внести 5,0 мл буферного рас-
твора № 2 и дать жидкости стечь. Затем извлечь микроколонку из
пробирки.
Измерение оптической плотности фракций А и Б производит-
ся с помощью спектрофотометра СФ
–56.
62
Порядок выполнения работы
1. Подготовить образцы крови для анализа.
2. Осуществить хроматографическое разделение фракций А и
Б.
3. Разделенные фракции А и Б поместить в кварцевые кюве-
ты, затем определить оптическую плотность данных растворов от-
носительно раствора сравнения (дистиллированная вода) при 414
нм.
4. По формуле (1) вычислить содержание гликозилированно-
го гемоглобина в анализируемом образце
крови. Используя ниже-
следующую таблицу соответствия, определить уровень гликемии
(гипогликемия, нормальный уровень, гипергликемия).
Среднесуточная
концентрация глюкозы,
ммоль/л
Содержание
гликозилированного
гемоглобина, %
0,8 3,0
1,7 3,5
2,6 4,0
3,6 4,5
4,4 5,0
5,4 5,5
6,3 6,0
7,2 6,6
8,2 7,0
9,1 7,5
10,0 8,0
11,0 8,5
11,9 9,0
12,8 9,5
13,7 10,0
14,7 10,5
15,6 11,0
AБ Порядок выполнения работы [ HbA1c ] = 100% , (1) AБ + 2,04 AА 1. Подготовить образцы крови для анализа. где AА – оптическая плотность фракции А; AБ – оптическая плот- 2. Осуществить хроматографическое разделение фракций А и ность фракции Б; 2,04 – коэффициент пересчета, зависящий от Б. объема фракций А и Б. 3. Разделенные фракции А и Б поместить в кварцевые кюве- ты, затем определить оптическую плотность данных растворов от- Методика измерений носительно раствора сравнения (дистиллированная вода) при 414 нм. Для количественного анализа гликозилированного гемогло- 4. По формуле (1) вычислить содержание гликозилированно- бина используется венозная кровь. го гемоглобина в анализируемом образце крови. Используя ниже- В пластиковую пробирку поместить 0,05 мл (одна капля) рас- следующую таблицу соответствия, определить уровень гликемии твора 1 и 0,5 мл крови. Перемешать, отобрать 0,02 мл, перенести в (гипогликемия, нормальный уровень, гипергликемия). пробирку, содержащую 0,2 мл раствора 2 и перемешать в течение 1–2 мин. Нагреть водопроводную воду до температуры 250C в термо- Среднесуточная Содержание стате. Поместить в термостат колбу с буферным раствором 1 и вы- концентрация глюкозы, гликозилированного держать в течение 15 мин при периодическом перемешивании. ммоль/л гемоглобина, % Промаркировать две стеклянные пробирки буквами А и Б. 0,8 3,0 Установить пробирки в штатив. 1,7 3,5 Подготовка микроколонки к анализу: снять верхнюю крыш- 2,6 4,0 ку, затем нижний колпачок и слить консервирующий раствор. 3,6 4,5 Вставить микроколонку в пробирку А и выдержать в течение 15–20 4,4 5,0 мин при комнатной температуре. В микроколонку внести по 5,0 мл буферного раствора №1 и 5,4 5,5 дать жидкости стечь. После полного стекания жидкости в микроко- 6,3 6,0 лонку нанести на верхний фильтр 0,1 мл исследуемого гемолизата, 7,2 6,6 выдержать 1–2 мин, затем в микроколонку внести 0,1 мл буферного 8,2 7,0 раствора № 1 и выдержать 3–5 мин. Затем внести в микроколонку 9,1 7,5 10,0 мл буферного раствора № 1 и дать жидкости стечь. 10,0 8,0 Микроколонку переместить таким образом, чтобы она нахо- 11,0 8,5 дилась в пробирке Б. В микроколонку внести 5,0 мл буферного рас- 11,9 9,0 твора № 2 и дать жидкости стечь. Затем извлечь микроколонку из пробирки. 12,8 9,5 Измерение оптической плотности фракций А и Б производит- 13,7 10,0 ся с помощью спектрофотометра СФ–56. 14,7 10,5 15,6 11,0 61 62
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 29
- 30
- 31
- 32
- 33
- …
- следующая ›
- последняя »