Медицинская биохимия. Бескровная Е.В - 4 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ОмГУ | Омск

Составители: 

Рубрика: 

7
Из (15) выражаем степень диссоциации путем несложных ал-
гебраических операций:
λλ
λλ
α
щелкисл
кисл
AA
AA
−
−
=
. (16)
Таким образом, значения
α
находят посредством измерений
оптической плотности буферных растворов с известным значением
pH. Определив для одного и того же раствора значения
α
и
µ
,
мы можем рассчитать значения pK
a
по формуле (3).
Методика измерений
Для приготовления трех буферных растворов (HCOONa-
HCOOH) с одинаковой концентрацией формиата натрия (0,1 М) и
pH, равным соответственно 4,0, 4,2, 4,4, необходимо в три стакана
на 50 мл налить по 25 мл 0,2 М раствора NaOH, затем оттитровать
каждый 0,4 М муравьиной кислотой до соответствующего pH, по-
сле чего общий объем каждого раствора довести в мерной колбе
до
50 мл дистиллированной водой.
Анализируемые растворы могут быть подготовлены следую-
щим образом. К исходному раствору цитидина 6,6⋅10
-5
М добавляем
растворы, указанные в нижеследующей таблице.
Номер
раствора
Характеристика
раствора
Объем
раствора
цитидина, мл
Добавляемый
раствор
1 кислый 9 1 мл 0,1 М HCl
2 щелочной 9 1 мл 0,1 М NaOH
3 буферный 9
1 мл буфера
pH=4,0
4 буферный 9
1 мл буфера
pH=4,2
5 буферный 9
1 мл буфера
pH=4,4
8
Растворы сравнения готовятся аналогично, только вместо
раствора цитидина необходимо использовать такое же количество
дистиллированной воды.
Контроль значений pH осуществляется с помощью pH-метра
Mettler Toledo MP2220.
Измерение оптической плотности исследуемых растворов
производится посредством автоматического спектрофотометра СФ-
56 в кварцевых кюветах с длиной оптического пути 1 см.
Порядок выполнения работы
1. Ознакомиться с устройством и принципом работы спек-
трофотометра СФ-56.
2. Приготовить буферные растворы.
3. Приготовить анализируемые растворы и растворы сравне-
ния.
4. Измерить спектры поглощения всех анализируемых растворов
относительно соответствующих растворов сравнения в оптическом
диапазоне 240÷310 нм с шагом 1 нм. Результаты измерения представить
в следующем виде:
Оптическая плотность
растворов
Длина волны, нм
1 2 3 4 5
5. По спектрам поглощения растворов № 1–5 определить ха-
рактеристическую и изобестическую (точка пересечения всех спек-
тральных кривых) длины волн.
6. Вычислить степень диссоциации (значения оптической
плотности следует брать при характеристической длине волны) и
ионную силу для растворов № 3–5. Затем рассчитать среднее зна-
чение pK
a
и K
a
. Результаты оформить в виде таблицы: 
      Из (15) выражаем степень диссоциации путем несложных ал-            Растворы сравнения готовятся аналогично, только вместо
гебраических операций:                                              раствора цитидина необходимо использовать такое же количество
                               λ                                    дистиллированной воды.
                             Aкисл − Aλ
                        α=    λ
                                           .                (16)          Контроль значений pH осуществляется с помощью pH-метра
                             Aкисл − Aщелλ                          Mettler Toledo MP2220.
                                                                          Измерение оптической плотности исследуемых растворов
     Таким образом, значения α находят посредством измерений
                                                                    производится посредством автоматического спектрофотометра СФ-
оптической плотности буферных растворов с известным значением
                                                                    56 в кварцевых кюветах с длиной оптического пути 1 см.
pH. Определив для одного и того же раствора значения α и µ ,
мы можем рассчитать значения pKa по формуле (3).
                                                                         Порядок выполнения работы
     Методика измерений                                                   1. Ознакомиться с устройством и принципом работы спек-
                                                                    трофотометра СФ-56.
      Для приготовления трех буферных растворов (HCOONa-
                                                                          2. Приготовить буферные растворы.
HCOOH) с одинаковой концентрацией формиата натрия (0,1 М) и
                                                                          3. Приготовить анализируемые растворы и растворы сравне-
pH, равным соответственно 4,0, 4,2, 4,4, необходимо в три стакана
                                                                    ния.
на 50 мл налить по 25 мл 0,2 М раствора NaOH, затем оттитровать
                                                                          4. Измерить спектры поглощения всех анализируемых растворов
каждый 0,4 М муравьиной кислотой до соответствующего pH, по-
                                                                    относительно соответствующих растворов сравнения в оптическом
сле чего общий объем каждого раствора довести в мерной колбе до
                                                                    диапазоне 240÷310 нм с шагом 1 нм. Результаты измерения представить
50 мл дистиллированной водой.
                                                                    в следующем виде:
      Анализируемые растворы могут быть подготовлены следую-
щим образом. К исходному раствору цитидина 6,6⋅10-5 М добавляем
                                                                                               Оптическая плотность растворов
растворы, указанные в нижеследующей таблице.                           Длина волны, нм
                                                                                              1      2       3       4       5
                                   Объем
  Номер     Характеристика                      Добавляемый
                                  раствора
 раствора      раствора                           раствор
                                цитидина, мл
                                                                          5. По спектрам поглощения растворов № 1–5 определить ха-
     1           кислый                 9       1 мл 0,1 М HCl      рактеристическую и изобестическую (точка пересечения всех спек-
                                                                    тральных кривых) длины волн.
     2          щелочной                9      1 мл 0,1 М NaOH
                                                                          6. Вычислить степень диссоциации (значения оптической
                                                 1 мл буфера        плотности следует брать при характеристической длине волны) и
     3          буферный                9
                                                    pH=4,0          ионную силу для растворов № 3–5. Затем рассчитать среднее зна-
                                                 1 мл буфера        чение pKa и Ka. Результаты оформить в виде таблицы:
     4          буферный                9
                                                    pH=4,2
                                                 1 мл буфера
     5          буферный                9
                                                    pH=4,4


                                 7                                                                  8

Страницы