Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 23 стр.

для     сельскохозяйственных        животных     мясомолочной         Чтобы       исключить      ложноположительные
специализации.                                                   результаты анализа и неправильную интерпретацию
        Количество       образца    исследуемого    материала,   полученных     данных,   а    также   предотвратить
необходимое для проведения одного анализа составляет 0,1 –       неконтролируемое     распространение    трансгенных
0,3 г (0,1 – 0,3 мл). Объем экстракта ДНК, полученного в ходе    растений, продуктов их переработки, генетически
пробоподготовки из одного образца исследуемого материала,        модифицированной ДНК и ее амплифицированных
(50-100 мкл) позволяет при необходимости повторять               фрагментов, при работе в лаборатории должны
проведение ПЦР с его использованием до 10 раз.                   безусловно соблюдаться следующие требования.
     Для     подготовки     проб    необходимо    использовать
одноразовые полипропиленовые пробирки, ступки и пестики,         ♦ Лаборатория должна быть разделена на зоны и/или
предварительно        обработанные    хромовой    смесью,    и     комнаты, предназначенные для каждой стадии
фламбированные инструменты - пинцеты, скальпели, ножницы.          ПЦР-исследования. В целом следует иметь не менее
     Пробы сухих гранулированных и сыпучих продуктов               трех несмежных комнат:
 отбирают в ступку по 3 - 5 г и растирают пестиком до            ¾ Помещение для пробоподготовки. Предназначено
 гомогенного состояния.                                            для выделения ДНК из биологического материала.
     Пробы плотных продуктов (сырых или подвергшихся             ¾ ПЦР-помещение. Предназначено для проведения
 кулинарной обработке) весом 3 - 5 г помещают в ступку,            ПЦР     (приготовление    реакционной     смеси,
 измельчают ножницами, затем растирают пестиком до                 амплификация) и должно быть оснащено
 гомогенного состояния.                                            ламинарным шкафом или ПЦР-боксом, создающим
      Пробы продуктов консистенции крахмала весом 100 - 300        стерильную рабочую зону, а так же всем
мг помещают в одноразовые пластиковые пробирки и добавляют         необходимым оборудованием для проведения ПЦР.
1,0 см3 физиологического раствора. Для анализа необходимо 50 -     По возможности данное помещение необходимо
150 мм3 образца.                                                   располагать как можно дальше от других, чтобы
     Пробы жидкой консистенции отбирают автоматическими            полностью исключить движение воздушных
 микродозаторами       с    одноразовыми    наконечниками    в     потоков из помещения для пробоподготовки и пост-
 одноразовые пробирки из полипропилена. Для анализа                ПЦР-помещения.           В     ПЦР-помещении
 необходимо 50 -150 мкл образца.                                   запрещается проводить все другие виды работ с
      Из полученных гомогенатов и суспензий проводят               образцами ДНК, растительным материалом или
выделение ДНК.                                                     микробиологические исследования.
                                                                 ¾ Пост-ПЦР-помещение.       Предназначено      для
                                                                   детекции продуктов ПЦР.

                 Меры предосторожности                           ♦ Каждое помещение ПЦР-лаборатории должно
                                                                   иметь свой набор реагентов, автоматических
                                                                   пипеток, наконечников к ним, пластиковой и