Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 26 стр.

*хранить при       температуре –20ºС,   при   ежедневном        порошковые полуфабрикаты), пробу необходимо
использовании – при температуре +4°С.                           предварительно измельчить ножницами или с
                                                                помощью гомогенизатора Поттера. При выделении
3. Реагенты для детекции продуктов ПЦР:                         ДНК из живых растительных тканей (листья,
3.1. Буфер для электрофореза (Сухая смесь для                   клубни,    плоды)     рекомендуется     выбирать
приготовления трис-боратного буферного раствора) – 1 пакет      неповрежденные богатые ДНК участки: у клубней и
3.1. Агароза – 2 пакета                                         листьев – кожура с верхним слоем мякоти, у
3.2. Бромистый этидий, готов к применению – 1 пробирка, 30      зеленых растений – молодая листовая пластинка.
     мкл
                                                             3. В эту же пробирку добавить 350 мкл буфера ЛБ и
Расходные материалы                                             гомогенизировать пробу, используя гомогенизатор
Наконечники для автоматических пипеток до 200 мкл и до          Поттера под пробирки типа Эппендорф, до
1000 мкл в штативах                                             однородного состояния.
Пробирки типа Эппендорф до 1,5 мл с крышкой
Перчатки латексные однократного использования                4. Пробирку      с     полученным        гомогенатом
Вода бидистиллированная                                         термостатировать при 65˚С в течение 40 мин.
Вода дистиллированная
Спирт этиловый 96%-ный                                       5. Извлечь пробирку из термостата, встряхнуть
Дезрастворы                                                     содержимое на вортексе и поместить в центрифугу
                                                                ТЕТА-10, центрифугировать 5 мин при 10 тыс.
                                                                об./мин. По окончании центрифугирования,
              Протокол проведения анализа                       прозрачную надосадочную жидкость полностью
                                                                отобрать с помощью автоматической пипетки и
1.1.Пробоподготовка                                             перенести в чистую пробирку типа Эппендорф до
                                                                1,5 мл, используя при этом одноразовые
1. Приготовление рабочих буферных растворов ОБ.                 наконечники.
   К содержимому флаконов с концентратами буферов ОБ 1 и     NB! В случае, когда содержимое пробирки с
   ОБ 2 прибавить по 40 мл 96%-ного этилового спирта             гомогенатом затвердело после инкубации в
   (этиловый спирт в набор не входит) и перемешать путем         термостате (например, если выделение ДНК
   переворачивания плотно закрытого флакона 5-6 раз.             производилось     из      муки     или       др.
                                                                 высококрахмалистых продуктов), в эту же
2. В пробирку типа Эппендорф до 1,5 мл внести ~0,1 г (100-       пробирку необходимо прибавить еще 350 мкл
   150 мкл по сухому насыпному объему) исследуемой               буфера ЛБ, содержимое перемешать на вортексе, и
   пробы. Если выделение ДНК производится из                     поместить пробирку в охладитель проб (+4ºС) или
   грубодисперсного материала (семена растений, сухие не