Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 27 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВСГУТУ | Улан-Удэ

Составители: 

Рубрика: 

холодильник на 15-20 мин. После этого проделать
операции по п. 5.
6. В пробирку с прозрачной надосадочной жидкостью
добавить 40 мкл суспензии сорбента (перед
использованием сорбента, пробирку, в которой он
находится, следует интенсивно встряхивать на вортексе до
исчезновения несуспендированного осадка).
7. Содержимое пробирки с пробой перемешивать
переворачиванием в течение 5-7 мин. Для удобства
проведения этой операции рекомендуется использовать
ротатор, переворачивающий пробирки со скоростью 20-30
об./мин
8. Поместить пробы в микроцентрифугу ТЕТА-2 и
центрифугировать 15 сек на максимальных оборотах (2
тыс. обор./мин).
9. Надосадочную жидкость полностью удалить при помощи
насоса с колбой-ловушкой или автоматической пипетки,
не задевая при этом осадка.
10. К осадку прибавить 500 мкл буфера ОБ 1, содержимое
пробирки встряхивать на вортексе до полного
суспендирования осадка.
11. Поместить пробы в микроцентрифугу ТЕТА-2 и
центрифугировать 15 сек на максимальных оборотах (2
тыс. обор./мин).
12. Надосадочную жидкость полностью удалить при помощи
насоса с колбой-ловушкой или автоматической пипетки,
не задевая при этом осадка.
13. Повторить операции, приведенные в пунктах 10 -
12.
14. К осадку прибавить 500 мкл буфера ОБ 2,
содержимое пробирки встряхивать на вортексе до
полного суспендирования осадка.
15. Поместить пробы в микроцентрифугу ТЕТА-2 и
центрифугировать 15 сек на максимальных
оборотах (2 тыс. обор./мин). Надосадочную
жидкость полностью удалить при помощи насоса с
колбой-ловушкой или автоматической пипетки, не
задевая при этом осадка.
16. Открытую пробирку поместить в термостат и
просушить осадок в ней при 65˚С в течение 10 мин.
17. К высушенному осадку добавить 100 мкл буфера
ТЕ, если пробоподготовка производится из
материала, богатого ДНК (растения, семена, мука),
и 50 мкл буфера ТЕ , если из продуктов
переработки растений (полуфабрикаты и готовые к
употреблению продукты). Пробирку закрыть.
18. Встряхивать содержимое пробирки на вортексе 5-10
сек до полного суспендирования осадка.
19. Термостатировать пробирку при 65˚С в течение 10
мин. По окончании термостатирования содержимое
пробирки еще раз встряхнуть на вортексе.
20. Поместить пробирку в центрифугу ТЕТА-10 и
центрифугировать 2 мин при 10 тыс. об./мин. 
   холодильник на 15-20 мин. После этого проделать            13. Повторить операции, приведенные в пунктах 10 -
   операции по п. 5.                                              12.

6. В пробирку с прозрачной надосадочной жидкостью             14. К осадку прибавить 500 мкл буфера ОБ 2,
   добавить    40   мкл    суспензии    сорбента     (перед       содержимое пробирки встряхивать на вортексе до
   использованием сорбента, пробирку, в которой он                полного суспендирования осадка.
   находится, следует интенсивно встряхивать на вортексе до
   исчезновения несуспендированного осадка).                  15. Поместить пробы в микроцентрифугу ТЕТА-2 и
                                                                  центрифугировать 15 сек на максимальных
7. Содержимое     пробирки   с   пробой    перемешивать           оборотах (2 тыс. обор./мин). Надосадочную
   переворачиванием в течение 5-7 мин. Для удобства               жидкость полностью удалить при помощи насоса с
   проведения этой операции рекомендуется использовать            колбой-ловушкой или автоматической пипетки, не
   ротатор, переворачивающий пробирки со скоростью 20-30          задевая при этом осадка.
   об./мин
                                                              16. Открытую пробирку поместить в термостат и
8. Поместить пробы в микроцентрифугу ТЕТА-2 и                     просушить осадок в ней при 65˚С в течение 10 мин.
   центрифугировать 15 сек на максимальных оборотах (2
   тыс. обор./мин).                                           17. К высушенному осадку добавить 100 мкл буфера
                                                                  ТЕ, если пробоподготовка производится из
9. Надосадочную жидкость полностью удалить при помощи             материала, богатого ДНК (растения, семена, мука),
   насоса с колбой-ловушкой или автоматической пипетки,           и 50 мкл буфера ТЕ , если из продуктов
   не задевая при этом осадка.                                    переработки растений (полуфабрикаты и готовые к
                                                                  употреблению продукты). Пробирку закрыть.
10. К осадку прибавить 500 мкл буфера ОБ 1, содержимое
    пробирки встряхивать на вортексе до полного               18. Встряхивать содержимое пробирки на вортексе 5-10
    суспендирования осадка.                                       сек до полного суспендирования осадка.

11. Поместить пробы в микроцентрифугу ТЕТА-2 и                19. Термостатировать пробирку при 65˚С в течение 10
    центрифугировать 15 сек на максимальных оборотах (2           мин. По окончании термостатирования содержимое
    тыс. обор./мин).                                              пробирки еще раз встряхнуть на вортексе.

12. Надосадочную жидкость полностью удалить при помощи        20. Поместить пробирку в центрифугу ТЕТА-10 и
    насоса с колбой-ловушкой или автоматической пипетки,          центрифугировать 2 мин при 10 тыс. об./мин.
    не задевая при этом осадка.

Страницы