Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 5 стр.

     Приложение . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .   52




      КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АСКОРБИНОВОЙ,
    ДЕГИДРОАСКОРБИНОВОЙ И ДИГЕТОГУЛОНОВОЙ КИСЛОТ
                В РАСТИТЕЛЬНЫХ ТКАНЯХ
    Аскорбиновая кислота (АК) - легкоокисляемое соединение, окисление
ее идет до дегидроаскорбиновой кислоты (ДАК), лактоновое кольцо кото-
рой легко гидролизуется с образованием кислоты с открытой цепью - диге-
тогулоновой кислоты (ДКГК).
    Метод количественного определения данных кислот основан на взаи-
модействии 2,4-динитрофенилгидразина с ДАК и ДКГК с образованием в
серной кислоте соответствующих азазонов. Азазоны ДАК и ДКГК дают
красное окрашивание, используемое для фотометрического определения.
    Для нахождения суммы всех кислот АК окисляют раствором 2,6-
дихлорфенолиндофенола до ДАК и содержание восстановленной формы
АК определяют по разности.
    При раздельном определении ДАК и ДКГК смесь подвергают действию
восстановителей, при этом восстанавливаться в АК может только ДАК.
В.В. Соколовский, Л.В. Лебедева, Т.Б. Лиэлуп [1] в качестве восстановите-
ля предложили использовать унитиол (димеркаптопропансульфонат на-
трия), что значительно упростило процедуру восстановления. При рH 7
унитиол в течение 10 минут восстанавливает ДАК в АК. Данные авторы
описали методику определения АК, ДАК и ДКГК в животных объектах,
описанный метод был несколько видоизменен для анализа растительного
материала (Г. Н. Чупахина).
                               Реактивы
    1. 2%-ный раствор 2,4-динитрофенилгидразина в 9 н. серной кислоте,
содержащей 0,25% тиомочевины. Для приготовления 100 мл реактива рас-
считать, какое количество концентрированной серной кислоты необходимо
взять с учетом ее концентрации и плотности, чтобы конечный раствор был
9 н. Например, исходный раствор концентрированной серной кислоты
95,6% и плотность его 1,830. В этом случае необходимо взять 25,2 мл ки-
слоты. В кислоте при нагревании или встряхивании растворить 2 г 2,4-
динитрофенилгидразина, а затем 0,25 г тиомочевины. Полученный раствор
смешать с нужным объемом воды, наливая кислотный раствор в воду так,
чтобы конечный объем равнялся 100 мл. Раствор хранить в холодильнике
не более одного месяца.

4