Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 7 стр.

кривой определяют, какой концентрации кислоты соответствует данная
оптическая плотность.
    Содержание кислоты Х на 1 г навески определяется по формуле:
                                     25 ⋅ C
                                  Х=         ,
                                     1,5 ⋅ n
где С - концентрация раствора кислоты, соответствующая данной оптиче-
ской плотности, мкг/мл;
    n - навеска растительного материала, г;
    25 - общий объем исследуемого раствора, мл;
    1,5 - объем раствора, взятый для анализа, мл.
    Количественное содержание кислот далее рассчитывается следующим
образом. В пробирке с экстрактом, полученным с унитиолом, определяется
только ДКГК, так как унитиол восстанавливает ДАК в АК, которая с
2,4-динитрофенилгидразином не определяется. В данную величину необ-
ходимо ввести поправку на разбавление за счет использования метафос-
форной кислоты для осаждения белков: полученный результат нужно уве-
личить на 20%.
    В пробирке с кислотным экстрактом определяется ДАК и ДКГК, по-
этому, вычтя из данной суммы количество ДКГК, найдём величину ДАК.
    В пробирке с кислотным экстрактом, где АК была окислена
2,6-дихлорфенолиндофенолом до ДАК, определяется сумма трех кислот
(АК, ДАК и ДКГК). Зная значение ДАК и ДКГК, находим по разности ве-
личину АК.
                     Построение калибровочной кривой
    Для построения калибровочной кривой готовят три раствора аскорби-
новой кислоты в 5%-ной метафосфорной кислоте:
    1-й раствор - 100 мг АК в 250 мл метафосфорной кислоты;
    2-й раствор - 0,5 мл 1-го раствора + 9,5 мл метафосфорной кислоты;
    3-й раствор - 0,5 мл 2-го раствора + 4,5 мл метафосфорной кислоты.
    Определенные объемы 1-го и 2-го растворов (1 мл, 0,75 мл, 0,5 мл,
0,25 мл - 2-го раствора и 1 мл, 0,5 мл - 3-го раствора), содержащие от 20 до
2 мкг АК, доводятся метафосфорной кислотой до 1,5 мл. В качестве кон-
троля берется 1,5 мл кислоты.
    Во все пробирки по каплям добавляется 0,001 н. раствор 2,6-дихлор
фенолиндофенола до появления слабо-розового окрашивания, устойчивого
в течение 30 секунд (АК перейдет в ДАК). Затем вносится по 0,5 мл рас-
твора 2,4-динитрофенилгидразина и объем доводится до 2,5 мл дистилли-
рованной водой. Дальше пробы обрабатываются по прописи, данной в раз-
деле “ход анализа”.

6