Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 9 стр.

та берется три пробы по 10 мл. К каждой пробе добавляется по 1 мл свеже-
приготовленного 0,025%-ного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола.
    Для приготовления раствора краски берётся 0,0625 г 2,6-
дихлорфенолиндофенола, навеска переносится в мерную колбу на 250 мл,
куда приливается 150-200 мл теплой дистиллированной воды и 6 капель
0,01 н. щелочи. Колба встряхивается в течение 10-15 минут до полного
растворения краски; после того как содержимое колбы примет комнатную
температуру, раствор доводится до метки водой и взбалтывается.
    Как только к пробе прилита краска, включается секундомер. Расти-
тельная вытяжка с краской хорошо перемешивается, раствор заливается в
кювету толщиной 10 мм. Кювета вставляется в держатель кювет колори-
метра, нулевая точка которого предварительно устанавливается по 2%-ной
метафосфорной кислоте. При колориметрировании вытяжки с краской не-
обходимо стрелку гальванометра постоянно подводить к нулю, пока не
пройдет 35 секунд, так как интенсивность окраски раствора все время
уменьшается. Этого времени достаточно, чтобы выполнить вышеописан-
ные операции. Фотометрирование ведется при 530 нм (зеленый свето-
фильтр). Параллельно колометрируется 10 мл 2%-ной метафосфорной ки-
слоты с 1 мл краски (контроль). Изменение в интенсивности окрашивания
контрольного и опытного образца пропорционально количеству аскорби-
новой кислоты, находящемуся в растительной вытяжке. Расчет произво-
дится по калибровочной кривой.
    Для построения калибровочной кривой 100 мг аскорбиновой кислоты
растворяется в 1 л 2%-ной метафосфорной кислоты. Из данного раствора
готовятся разведения, содержащие 1, 2, 3 мкг и т. д. аскорбиновой кислоты
в 1 мл. По разнице в колориметрировании раствора 2%-ной метафосфор-
ной кислоты и стандартных растворов строится калибровочная кривая.
    В том случае, когда вытяжка растений содержит значительное количе-
ство аскорбиновой кислоты (около 700 мкг на 1 г), при добавлении 1 мл
краски к 10 мл вытяжки краска полностью обесцвечивается аскорбиновой
кислотой. В этом случае вытяжку необходимо разбавить вдвое 2%-ной ме-
тафосфорной кислотой и учесть это при расчете содержания аскорбиновой
кислоты.
                        Вычисление результатов
    Содержание аскорбиновой кислоты на 1 г исследуемого материала вы-
                                       a⋅V
числяется по формуле:              X=       мкг,
                                         g
где а - содержание аскорбиновой кислоты в 1 мл вытяжки, найденное по
калибровочной кривой в мкг;

8