Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 10 стр.

UptoLike

Составители: 

Рубрика: 

9
V - объем экстракта, полученного из данной навески;
g - навеска исследуемого материала в граммах.
Определение содержания аскорбиновой кислоты в растениях данным
методом так же, как и титрационным, для некоторых объектов дает завы-
шенные результаты по сравнению с хромотографическим определением,
так как краской оттитровывается не только аскорбиновая кислота, но и не-
которые близкородственные соединения, находящиеся в экстракте. Однако
благодаря своей
простоте, хорошей повторяемости результатов этот метод
[1] может быть использован для массовых определений витаминной цен-
ности растений, для сравнительного определения содержания аскорбино-
вой кислоты, а также для количественного определения аскорбиновой ки-
слоты, выделенной хромотографическим методом.
Аскорбиновая кислота является легкоокисляющимся соединением. При
количественном ее определении необходимо иметь в виду, что свет уско-
ряет окисление аскорбиновой кислоты даже в присутствии стабилизирую-
щих веществ, поэтому все операции по растиранию, фильтрованию и ко-
лориметрированию лучше вести на неярком свету и по возможности быст-
ро.
Литература
1. Чупахина Г.Н. Колориметрическое определение аскорбиновой кислоты //
Специальный практикум по биохимии и физиологии растений /Под ред.
М.М. Окунцова. Калининград, 1981. С. 14-16.
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ
За основу взят метод Hewitt E.J. и Dickes G.J. спектрофотометрического
определения аскорбиновой кислоты (АК) [1]. Навеска растительного мате-
риала (1 грамм для проростков ячменя) гомогенизируется с 10 мл 2%-ной
метафосфорной кислоты. Гомогенат переносится в мерную колбу на 50 мл.
Объем доводится до метки 2%-ной НРО
3
и 0,21 М Na
3
PO
4
, взятыми в со-
отношении 3 : 2 (V/V , рН 7,3 - 7,4). Экстракт центрифугируется 15 мин
при 3000 об/ мин, экстинция раствора измеряется на спектрофотометре
при 265 нм против стандарта - вышеуказанных растворов НРО
3
и Na
3
PO
4
,
взятых в том же соотношении. Результаты вычисляются по формуле :
нм 265 при АК для экстинции молярной ткоэффициен
мл во-колнм 265 при экстинция
мкМ
=
.
Коэффициент молярной экстинции для аскорбиновой кислоты при
265 нм и рН = 6,8 и выше равен 1,65 - 1,655
.
10
4
[1].
Микромоли переводятся в граммы по формуле: г = мкМ
.
Мм АК (176).
    V - объем экстракта, полученного из данной навески;
    g - навеска исследуемого материала в граммах.
    Определение содержания аскорбиновой кислоты в растениях данным
методом так же, как и титрационным, для некоторых объектов дает завы-
шенные результаты по сравнению с хромотографическим определением,
так как краской оттитровывается не только аскорбиновая кислота, но и не-
которые близкородственные соединения, находящиеся в экстракте. Однако
благодаря своей простоте, хорошей повторяемости результатов этот метод
[1] может быть использован для массовых определений витаминной цен-
ности растений, для сравнительного определения содержания аскорбино-
вой кислоты, а также для количественного определения аскорбиновой ки-
слоты, выделенной хромотографическим методом.
    Аскорбиновая кислота является легкоокисляющимся соединением. При
количественном ее определении необходимо иметь в виду, что свет уско-
ряет окисление аскорбиновой кислоты даже в присутствии стабилизирую-
щих веществ, поэтому все операции по растиранию, фильтрованию и ко-
лориметрированию лучше вести на неярком свету и по возможности быст-
ро.
                               Литература
   1. Чупахина Г.Н. Колориметрическое определение аскорбиновой кислоты //
Специальный практикум по биохимии и физиологии растений /Под ред.
М.М. Окунцова. Калининград, 1981. С. 14-16.

           СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
                  АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ
   За основу взят метод Hewitt E.J. и Dickes G.J. спектрофотометрического
определения аскорбиновой кислоты (АК) [1]. Навеска растительного мате-
риала (1 грамм для проростков ячменя) гомогенизируется с 10 мл 2%-ной
метафосфорной кислоты. Гомогенат переносится в мерную колбу на 50 мл.
Объем доводится до метки 2%-ной НРО3 и 0,21 М Na3PO4, взятыми в со-
отношении 3 : 2 (V/V , рН 7,3 - 7,4). Экстракт центрифугируется 15 мин
при 3000 об/ мин, экстинция раствора измеряется на спектрофотометре
при 265 нм против стандарта - вышеуказанных растворов НРО3 и Na3PO4,
взятых в том же соотношении. Результаты вычисляются по формуле :
                       экстинция при 265 нм ⋅ кол - во мл
      мкМ =                                                        .
             коэффициент молярной экстинции для АК при 265 нм
   Коэффициент молярной экстинции для аскорбиновой кислоты при
265 нм и рН = 6,8 и выше равен 1,65 - 1,655.104 [1].
   Микромоли переводятся в граммы по формуле: г = мкМ. Мм АК (176).

                                                                        9