Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 6 стр.

    2. 5%-ная метафосфорная кислота (хранить в холодильнике не более
двух недель).
    3. 85%-ный раствор серной кислоты (в 100 мл дистиллята влить 900 мл
концентрированной серной кислоты).
    4. 2.10-3 М унитиол (0,84 мл 5%-ного раствора ампулированного препа-
рата в 100 мл фосфатного буфера 0,2 М, рH=7). Раствор хранить не более
суток.
    5. 0,001 н. раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола (краска Тильманса).
Хранить в темноте не более одной недели.
                                Ход анализа
    Навеску листьев (около 0,5 г) залить в фарфоровой ступке 10 мл 5%-
ной метафосфорной кислоты, растереть. Гомогенат количественно перене-
сти в мерную колбу на 25 мл, объем довести до метки метафосфорной ки-
слотой; после встряхивания центрифугированием отделить осадок (20 ми-
нут при 3000 об/мин).
    В две градуированные пробирки с притертыми пробками налить по 1,5
мл полученной вытяжки и в одну из них прибавить по каплям 0,001 н. рас-
твор 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления слабо-розового окрашива-
ния, устойчивого в течение 30 секунд.
    В третью пробирку налить 1,5 мл вытяжки, приготовленной на 2.10-3 М
растворе унитола. Данная вытяжка готовится следующим образом: навеска
листьев (около 0,5 г) растирается с раствором унитиола, переносится в
мерную колбу на 25 мл, объем доводится до метки раствором унитиола,
приготовленным на фосфатном буфере. Содержимое колбы встряхнуть,
колбу поместить в холодильник на 10 минут - это время необходимо для
восстановления ДАК в АК. Центрифугированием отделить осадок. Белки,
находящиеся в вытяжке, осаждаются метафосфорной кислотой: к 16 мл
центрифугата прибавить 4 мл 5%-ной метафосфорной кислоты, выпавшие
в осадок белки удалить центрифугированием (15 минут, 3000 об/мин).
    Во все три пробирки прибавить по 0,5 мл 2,4-динитрофенилгидразина и
довести объем до 2,5 мл дистиллированной водой. Пробирки поместить в
термостат на 20 минут при температуре 100оС. По истечении указанного
времени пробирки перенести в ледяную баню и в каждую из них добавить
по 2,5 мл (тремя порциями) серной кислоты.
    Через час окрашенные растворы фотометрируют при длине волны
520 нм в кювете на 10 мм по сравнению с контрольным раствором, кото-
рый готовится и обрабатывается как опытные, только вместо вытяжки ис-
пользуется раствор 5%-ной метафосфорной кислоты. По калибровочной



                                                                       5