Морфология и культивирование микроорганизмов. Чурикова В.В - 24 стр.

                                   24


            ТЕМА 3. НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ
                      БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ

                   Работа 6. Окраска бактерий по Граму

     Бактериальная клетка состоит из протопласта, окруженного клеточной
оболочкой. Оболочка (клеточная стенка) – тончайшая бесцветная
структура, невидимая в световой микроскоп без специальной обработки
(ее размеры 0,01-0,04 мкм). По строению клеточной оболочки все
прокариоты отнесены к грамотрицательным и грамположительным
бактериям. В состав клеточной оболочки входит пептидогликан (муреин),
кроме     того   обнаружены     тейхоевые    кислоты,     липопротеиды,
липополисахариды и фосфолипиды. Микоплазмы не имеют клеточной
оболочки. У архебактерий клеточная оболочка весьма разнообразна по
химическим компонентам: у одних бактерий в составе клеточной оболочки
– псевдомуреин, у других – липополисахариды и другие соединения.
     Клеточная оболочка играет защитную роль, определяет форму клетки.
Окраска по Граму является важнейшим признаком бактерий и зависит от
химического состава клеточной стенки и физиологии клеток
микроорганизмов. Бактерии окрашивают генцианвиолетом, йодом в
йодистом калии, затем обрабатывают спиртом. Бактерии, сохраняющие
окраску, носят название грамположительных, утрачивающие – грам-
отрицательных.
     Порядок работы: делают на одном стекле три мазка -
грамположительного, исследуемого и грамотрицательного микроба.
     После высыхания и фиксирования мазков бактерий их обрабатывают
красителями в следующем порядке:
     1) генцианвиолетом – 1-2 минуты,
     2) йодом в иодистом калии (раствор Люголя) – 1-2 минуты,
     3) промыть водой,
     4) обработать 96% спиртом – 30 сек.,
     5) промыть водой,
     6) разбавленным фуксином - 1-2 минуты,
     7) промыть водой,
     8) Просушивают препарат и рассматривают в микроскоп, сравнивая
        окраску мазка исследуемой культуры с окраской грам-
        положительного     микроба    (фиолетовый     цвет)   и    грам-
        отрицательного (красный).
     Задание:
     Провести окраску по Граму, используя культуры кишечной палочки
Escherichia coli (грамотрицательная), сарцин (грамположительная) или
дрожжей.