Основы биотехнологии: культивирование изолированных клеток и тканей растений. Учебно-методическое пособие. Часть 2. Цыренов В.Ж. - 12 стр.

UptoLike

Составители: 

Рубрика: 

25 26
ее натриевая соль, которые улучшают доступность железа для кле-
ток.
Таблица 2
Состав питательных сред, применяемых при культивировании клеток и тканей
(по Р.Г.Бутенко, 1999)
Концентрация питательных сред, мг/л
Компонент сред
Мурасиге
и Ску-
га,1962
Гамборга
и Эвеле-
га,1968
Уайта,
1939
Нича и
Нич,1974
-1975
1 2 3 4 5
KNO
3
NH
4
NO
3
Ca(NO
3
)
2
Ca(NO
3
)
2
4H
2
O
(NH
4
)
2
SO
4
MgSO
4
7H
2
O
СaCl
2
H
2
O
CaCl
2
2H
2
O
KCl
KH
2
PO
4
NaH
2
PO
4
H
2
O
MnSO
4
Н
2
О
MnSO
4
4Н
2
О
ZnSO
4
4Н
2
О
ZnSO
4
7Н
2
О
H
3
BO
4
CuSO
4
5Н
2
О
Na
2
MoO
4
2Н
2
О
CoCl
2
6Н
2
О
FeSO
4
7Н
2
О
NaEDTA2Н
2
О
Cеквестрен 330-Fe
Мезоинозит
Аскорбиновая кислота
Тиамин – HCl
Пиридоксин – HCl
Никотиновая кислота
Сахароза
Агар «Дифко», гель-
1900
1650
-
-
-
370
-
440
-
170
-
-
22,3
8,6
-
6,2
0,025
0,25
0,025
27,8
37,3
-
100
-
-
0,5
0,5
0,5
30 000
3000
-
-
-
134
500
-
150
-
-
150
10
-
-
2
3
0,075
0,25
-
-
-
28
-
-
-
-
-
20 000
81
-
142
-
-
74
-
-
65
12
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
2000
950
72
-
-
-
185
166
-
-
68
-
-
25
-
10
10
0,025
0,25
-
27,8
37,3
-
200
3
3
1
-
60 000
7000
1 2 3 4 5
рит, агароза - -
2.3. Влияние физических факторов.
На рост и развитие растительных тканей in vitro большое
влияние оказывают физические факторысвет, температура,
аэрация, влажность.
Свет. Большинство каллусных тканей могут расти в условиях
сильного освещения или в темноте, так как они не способны фото-
синтезировать. Вместе с тем свет может выступать как фактор,
обеспечивающий морфогенез и активирующий процесс вторично-
го синтеза. В качестве источника света используют люминесцент-
ные лампы. Для большинства растений оптимум освещенности со-
ставляет примерно 1000 люкс. Кроме интенсивности освещенности
на культуру ткани и её физиологические особенности влияет каче-
ство света. Так, более 20 флавонов и флавонолевых гликозидов об-
разуются в культурах клеток петрушки после освещения её непре-
рывным люминесцентным светом «холодный белый».
Температура. Для большинства каллусных культур опти-
мальна температура 26°С. В отличие от роста культур клеток и
тканей индукция их морфогенеза требует более низких температур
(18-20°С).
Аэрация. Для выращивания суспензионных культур большое
значение имеет аэрация. Особенно важно снабжение воздухом
культивируемых клеток в больших объемах ферментеров.
При выращивании клеток в малых объемах (в колбах) нор-
мальная аэрация достигается при постоянном перемешивании сус-
пензии.
Влажность. Оптимальная влажность в помещении, где растут
культуры, должны составлять 60-70%.
2.4. Методы культивирования изолированных клеток и
тканей для получения БАВ.
ее натриевая соль, которые улучшают доступность железа для кле-                       1            2        3         4         5
                                                                               рит, агароза        -                  -
ток.

                                                             Таблица 2
Состав питательных сред, применяемых при культивировании клеток и тканей         2.3. Влияние физических факторов.
                           (по Р.Г.Бутенко, 1999)                                На рост и развитие растительных тканей in vitro большое
                             Концентрация питательных сред, мг/л           влияние оказывают физические факторы – свет, температура,
                       Мурасиге Гамборга                    Нича и         аэрация, влажность.
  Компонент сред                                  Уайта,
                         и Ску-      и Эвеле-              Нич,1974              Свет. Большинство каллусных тканей могут расти в условиях
                                                   1939
                         га,1962     га,1968                 -1975
         1                2           3          4           5
                                                                           сильного освещения или в темноте, так как они не способны фото-
        KNO3             1900       3000        81          950            синтезировать. Вместе с тем свет может выступать как фактор,
       NH4NO3            1650         -          -          72             обеспечивающий морфогенез и активирующий процесс вторично-
       Ca(NO3)2            -          -         142          -             го синтеза. В качестве источника света используют люминесцент-
   Ca(NO3)2⋅4H2O           -          -          -           -             ные лампы. Для большинства растений оптимум освещенности со-
      (NH4)2SO4            -         134         -           -
                          370        500        74          185            ставляет примерно 1000 люкс. Кроме интенсивности освещенности
    MgSO4⋅7H2O
      СaCl2⋅H2O            -          -          -          166            на культуру ткани и её физиологические особенности влияет каче-
     CaCl2⋅2H2O           440        150         -           -             ство света. Так, более 20 флавонов и флавонолевых гликозидов об-
         KCl               -          -         65           -             разуются в культурах клеток петрушки после освещения её непре-
       KH2PO4             170         -         12          68             рывным люминесцентным светом «холодный белый».
    NaH2PO4⋅H2O            -         150         -           -
                           -         10          -           -                   Температура. Для большинства каллусных культур опти-
     MnSO4⋅Н2О
                         22,3         -          -          25             мальна температура 26°С. В отличие от роста культур клеток и
    MnSO4⋅4Н2О
     ZnSO4⋅4Н2О
                          8,6         -          -           -             тканей индукция их морфогенеза требует более низких температур
                           -          2          -          10             (18-20°С).
     ZnSO4⋅7Н2О           6,2         3          -          10
        H3BO4            0,025      0,075        -        0,025
                                                                                 Аэрация. Для выращивания суспензионных культур большое
     CuSO4⋅5Н2О          0,25       0,25         -         0,25            значение имеет аэрация. Особенно важно снабжение воздухом
   Na2MoO4⋅2Н2О          0,025        -          -           -             культивируемых клеток в больших объемах ферментеров.
     CoCl2⋅6Н2О          27,8         -          -         27,8                  При выращивании клеток в малых объемах (в колбах) нор-
     FeSO4⋅7Н2О          37,3         -          -         37,3            мальная аэрация достигается при постоянном перемешивании сус-
   NaEDTA⋅2Н2О             -         28          -           -
  Cеквестрен 330-Fe       100         -          -          200
                                                                           пензии.
     Мезоинозит            -          -          -           3                   Влажность. Оптимальная влажность в помещении, где растут
Аскорбиновая кислота       -                     -           3             культуры, должны составлять 60-70%.
    Тиамин – HCl          0,5         -          -           1
  Пиридоксин – HCl        0,5         -          -           -
Никотиновая кислота       0,5         -          -        60 000
       Сахароза         30 000     20 000      2000        7000
                                                                               2.4. Методы культивирования изолированных клеток и
 Агар «Дифко», гель-                                                       тканей для получения БАВ.
                                                                   25            26