ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
27 28
В качестве источника БАВ используют каллусную ткань, ко-
торую получают твердофазным способом культивирования и глу-
бинным суспензионным культивированием, осуществленным в пе-
риодическом и непрерывном (проточном) режимах (Чуегов и др.,
2003).
2.4.1. Твердофазный способ культивирования.
Каллусные клетки получают из фрагментов тканей разных
органов высших растений, помещая кусочки такой ткани в пита-
тельную среду (пробирки, колбы, чашки Петри). Соблюдают стро-
гую стерильность.
Чтобы обеспечить развитие каллусных клеток в питательных
средах (табл. 2), содержащих необходимые для роста вещества,
клетки тканей, запасающей паренхимы, корня и стебля, мезофилла
листа и других тканей должны терять способность дифференци-
ровки. Недифференцированному развитию клеток способствует
прединкубация эксплантов на среде без гормонов в течение 3-6 су-
ток.
Через 4-6 недели культивирования трансплантанта возникает
первичный каллус, который необходимо перенести на свежую пи-
тательную среду. При культивировании на агаризованных средах
кусочек каллуса должен иметь массу 60-100 мг на 30-40 мл свежей
среды. Каллусная ткань, вырасшая на поверхности твердой пита-
тельной среды, имеет аморфную структуру, представляющую со-
бой массу тонкостенных пареахимных клеток. Химический состав
каллусной ткани обычно незначительно отличается от соответст-
вующего органа растения.
Каллусные клетки после ряда делений переходят на обычный
для данного растения цикл развития, т.е. начинается дифферен-
циация. Этот процесс регулируют гормоны.
2.4.2. Глубинное суспензионное культивирование.
Для глубинного культивирования и получения суспензион-
ных культур необходимо использовать линии клеток, образующих
небольшие агрегаты (по 5-10 клеток). Более пригодна каллусная
ткань рыхлого типа, которая легко фрагментируется на отдельные
клетки и небольшие агрегаты при перемешивании её в нере…..
жидкую среду. Трансплантат желательно обрабатывать пектина-
зой. Рекомендуется использовать среды, содержащие 2,4-
дихлорфеноксиуксусную кислоту и не содержащие ионы Ca. При
подборе среды культивирования важно из среды исключить цито-
кинины или снижать их концентрацию, а концентрацию ауксинов
увеличивать.
Перед пересевом первичную культуру фильтруют через два
слоя марли или через сита (нейлоновые, металлические), чтобы
отделить крупные агрегаты каллусной ткани и остатки трансплан-
тата. На образование клеточных агрегатов также сказывает влия-
ние интенсивность перемешивания среды, так как клетки чрезвы-
чайно чувствительны и быстро лизируются. Большинство клеток
погибает.
Суспензионные культуры, как правило, состоят из отдельных
клеток, варьирующих по форме и размеру, и неоднородных много-
клеточных агрегатов. Соотношение отдельных клеток и таких аг-
регатов в суспензии зависит от видовой принадлежности растения
и условий культивирования.
В процессе культивирования активно делящиеся клетки не
только поглощают питательные вещества, но и выделяют продук-
ты собственной жизнедеятельности, в том числе и ферменты: α-
амилаза, фосфогидролаза и др. они изменяют дисперсность сус-
пензии. Повышать дисперсность суспензионных культур можно
добавлением в среду низких концентраций пектиназы и целлюло-
зы. При управлении процессом выращивания клеток важно иметь
гомогенную систему.
Глубинное культивирование можно осуществлять в колбах
на качалках при частоте вращения 100-120 об/мин. На 60-100 мл
среды используют 2-3 г свежей каллусной ткани, чтобы начальная
плотность клеточной популяции составила 0,5⋅10
5
– 2,5⋅10
5
кле-
ток/мл среды. Сосуды с суспензией закрепляют на платформе тей-
В качестве источника БАВ используют каллусную ткань, ко- небольшие агрегаты (по 5-10 клеток). Более пригодна каллусная торую получают твердофазным способом культивирования и глу- ткань рыхлого типа, которая легко фрагментируется на отдельные бинным суспензионным культивированием, осуществленным в пе- клетки и небольшие агрегаты при перемешивании её в нере….. риодическом и непрерывном (проточном) режимах (Чуегов и др., жидкую среду. Трансплантат желательно обрабатывать пектина- 2003). зой. Рекомендуется использовать среды, содержащие 2,4- дихлорфеноксиуксусную кислоту и не содержащие ионы Ca. При 2.4.1. Твердофазный способ культивирования. подборе среды культивирования важно из среды исключить цито- Каллусные клетки получают из фрагментов тканей разных кинины или снижать их концентрацию, а концентрацию ауксинов органов высших растений, помещая кусочки такой ткани в пита- увеличивать. тельную среду (пробирки, колбы, чашки Петри). Соблюдают стро- Перед пересевом первичную культуру фильтруют через два гую стерильность. слоя марли или через сита (нейлоновые, металлические), чтобы Чтобы обеспечить развитие каллусных клеток в питательных отделить крупные агрегаты каллусной ткани и остатки трансплан- средах (табл. 2), содержащих необходимые для роста вещества, тата. На образование клеточных агрегатов также сказывает влия- клетки тканей, запасающей паренхимы, корня и стебля, мезофилла ние интенсивность перемешивания среды, так как клетки чрезвы- листа и других тканей должны терять способность дифференци- чайно чувствительны и быстро лизируются. Большинство клеток ровки. Недифференцированному развитию клеток способствует погибает. прединкубация эксплантов на среде без гормонов в течение 3-6 су- Суспензионные культуры, как правило, состоят из отдельных ток. клеток, варьирующих по форме и размеру, и неоднородных много- Через 4-6 недели культивирования трансплантанта возникает клеточных агрегатов. Соотношение отдельных клеток и таких аг- первичный каллус, который необходимо перенести на свежую пи- регатов в суспензии зависит от видовой принадлежности растения тательную среду. При культивировании на агаризованных средах и условий культивирования. кусочек каллуса должен иметь массу 60-100 мг на 30-40 мл свежей В процессе культивирования активно делящиеся клетки не среды. Каллусная ткань, вырасшая на поверхности твердой пита- только поглощают питательные вещества, но и выделяют продук- тельной среды, имеет аморфную структуру, представляющую со- ты собственной жизнедеятельности, в том числе и ферменты: α- бой массу тонкостенных пареахимных клеток. Химический состав амилаза, фосфогидролаза и др. они изменяют дисперсность сус- каллусной ткани обычно незначительно отличается от соответст- пензии. Повышать дисперсность суспензионных культур можно вующего органа растения. добавлением в среду низких концентраций пектиназы и целлюло- Каллусные клетки после ряда делений переходят на обычный зы. При управлении процессом выращивания клеток важно иметь для данного растения цикл развития, т.е. начинается дифферен- гомогенную систему. циация. Этот процесс регулируют гормоны. Глубинное культивирование можно осуществлять в колбах на качалках при частоте вращения 100-120 об/мин. На 60-100 мл 2.4.2. Глубинное суспензионное культивирование. среды используют 2-3 г свежей каллусной ткани, чтобы начальная Для глубинного культивирования и получения суспензион- плотность клеточной популяции составила 0,5⋅105 – 2,5⋅105 кле- ных культур необходимо использовать линии клеток, образующих ток/мл среды. Сосуды с суспензией закрепляют на платформе тей- 27 28
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 11
- 12
- 13
- 14
- 15
- …
- следующая ›
- последняя »