Основы биотехнологии: культивирование клеток человека и животных. Цыренов В.Ж. - 13 стр.

ют, поворачивают другой стороной). Погибшие эмбрионы              В целях репродукции вируса особую роль сыграли по-
затем передают в отделение сбора вирусного материала.       чечные и алланто-зрелые ткани. Из них первые получали от
Там аллантоисную жидкость с вирусом отсасывают и пере-      обезьян, вторые – из амниотических оболочек женщин-
носят в стерильные емкости. Инактивацию вирусов при оп-     рожениц при нормальных родах. Свежие почки от здоровых
ределенной температуре проводят обычно с помощью фор-       обезьян, например, макаки-резус или африканских зеленых
малина, фенола или других веществ. Применяя высокоско-      мартышек, сразу же после экстирпации (от лат. extirpatio –
ростное центрифугирование или аффинную хроматогра-          полное вырезание, вылущение) декапсилируют, рассекают
фию, удается получить высокоочищенные вирусные части-       пополам, удаляют лоханки, нарезают паренхиматозную
цы.                                                         ткань на мелкие кусочки, трипсинируют (обрабатывают
      Собранный вирусный материал подвергают контролю       протеолитическим ферментом трипсином), и клетки (поряд-
и лиофильной сушке. Контролю подлежат следующие пока-       ка 3⋅103 мл) помещают в специальную среду, термостати-
затели: стерильность, безвредность и специфическая актив-   руют при 45°С в качающихся аппаратах. Спустя сутки,
ность. Вирусный материал должен отвечать ряду требова-      культуру заражают, например, вирусом полиомиелита, че-
ний, прежде всего, - отсутствие живого вируса в убитой      рез 4-7 дней в надосадочный жидкости накапливается ви-
вакцине. Безвредность и специфическую активность оцени-     рус, на основе которого получают вакцину (Цыренов, 2004).
вают на животных, и только после этого вакцину разрешают          По способам культивирования особое место занимает
испытывать на волонтерах или добровольцах. После ус-        вирус бешенства. Его репродукцию осуществляют на моз-
пешного проведения клинической апробации вакцину раз-       говой ткани целостных организмов, используя для этого
решают применять в широкой медицинской практике.            кроликов, крыс, овец.
      Из прочих эмбриональных тканей используют эм-               Л. Пастер в 80-е годы XIX века выделил от больной
брионы мышей или других млекопитающих животных, а           собаки вирус бешенства, и после ряда пассажей через мозг
также абортированные плоды человека.                        кроликов он добился того, что вирус приобрел свойства вы-
      Эмбриональное перевиваемые ткани доступны после       зывать заболевание у данных животных после определенно-
обработки трипсином, поскольку в таких тканях еще не        го и постоянного инкубационного периода (4-6 дней). Такой
формируется большого количества межклеточного вещест-       вирус, в отличие от вируса «уличного» бешенства, получил
ва (в том числе небелковой природы). Клетки разделяются,    название Virus fixe (фиксированный вирус). Его-то и при-
и после необходимых обработок их культивируют в специ-      меняют для получения вакцин.
альных средах в монослое или в суспензированном состоя-           Перевиваемые опухоли животных, в частности, асцит-
нии.                                                        ные, нашли широкое применение на практике. Они хорошо
      Ткани, изолируемые от животных после рождения, от-    растут в форме суспензии изолированных клеток в экссуда-
носятся к разряду зрелых. Чем их возраст больше, тем с      те брюшной полости мышей и крыс. Опухолевые размно-
большим трудом они культивируются. Однако, после ус-        жаются в асцитной жидкости, которую отсасывают из
пешного выращивания, они «выравниваются» и мало чем         брюшной полости с помощью шприца (или с помощью пи-
отличаются от эмбриональных клеток.

                                                       25   26