ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
23 24
(инокулят) в концентрации 2⋅10
5
клеток/мл для периодиче-
ского культивирования, длившегося 3 суток до получения
максимальной плотности 2,5⋅10
6
клеток/мл (суспензионные
культуры). При хемостатном культивировании скорость по-
дачи среды и отъема культуры составляла 0,3 сут
-1
.
Таблица 2
Накопление клеток L 1210 при периодическом и непрерывном
культивировании (по М.Ж. Тови, 1985)
Урожайность клеток
на 1 мг
глюкозы
на 1 мл
среды
Способ
выращивания
Объем
среды, л
× 10
6
мкг
× 10
6
в неделю
Периодический
0,3 3,5 524 2,3
1,38⋅10
9
Непрерывный
(хемостатный)
0,3 6,2 601 6,2
1,12⋅10
10
Естественно, что время, затрачиваемое на подготовку
смежных циклов и их реализацию при периодическом куль-
тивировании, является непроизводительным.
4. ЭМБРИОНАЛЬНЫЕ И ДРУГИЕ ТКАНИ
ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСОВ И ПОЛУЧЕНИЯ
ВИРУСНЫХ ВАКЦИН
Из эмбриональных тканей наиболее широко исполь-
зуются эмбриональные ткани цыпленка, мыши и человека.
Особенной выгодой отличаются куриные эмбрионы (по
доступности) 10-12-суточного возраста. Они используются
для репродукции вирусов и изготовления вирусных вакцин,
а также антигенных препаратов еще с 1931 г.
Инкубированные при 38°С куриные яйца овоскопи-
руют (просвечивают), отбраковывают «прозрачные», неоп-
лодотворенные экземпляры и сохраняют оплодотворенные
– у них хорошо видны кровеносные сосуды и движение эм-
брионов.
Заражение эмбрионов проводят вручную или автома-
тически. Последний способ применяют в крупномасштаб-
ном производстве противогриппозных вакцин и др. Мате-
риал, создающий вирусы, вводят с помощью шприца (бата-
реи шприцов) в различные части эмбриона (рис. 6) в асеп-
тических условиях.
Рис. 6. Структурные части десяти-
дневного куриного эмбриона:
1 – плод, 2 - аллантоисная
полость, 3 - хорионалланто-
исная оболочка, 4 - полость
амниона, 5 - оболочка ам-
ниона, 6 - желточный мешок,
7 - белочный мешок, 8 - воз-
душное пространство, 9 -
скорлупа, 10 – скорлупная
оболочнка, 11 – введение ви-
русного материала в аллан-
тоисную полость
Материалом для заражения может быть суспензия
растертой мозговой ткани (для вируса бешенства), печени,
селезенки, почек (применительно к хламидиям орнитоза и
т.д.). В целях предотвращения бактериального загрязнения
применяют антибиотики (пенициллин), грибкового загряз-
нения - нистатин и др. полиены.
Чаще всего, суспензию вирусного материала вводят в
аллантоисную полость или реже на хорионаллантоисную
оболочку в количестве 0,05-0,1 мл, прокалывая продезин-
фицированную скорлупу (йодированным этанолом) на рас-
четную глубину.
Отверстие закрывают расплавленным парафином и
эмбрионы помещают в термостат при температуре 36-
37,5°С. Продолжительность инкубации зависит от типа и
активности вируса. Через 2-4 суток наблюдается изменение
оболочек с последующей гибелью эмбрионов. Зараженные
эмбрионы контролируют ежедневно 1-2 раза (овосколиру-
(инокулят) в концентрации 2⋅105 клеток/мл для периодиче- Заражение эмбрионов проводят вручную или автома-
ского культивирования, длившегося 3 суток до получения тически. Последний способ применяют в крупномасштаб-
максимальной плотности 2,5⋅106 клеток/мл (суспензионные ном производстве противогриппозных вакцин и др. Мате-
культуры). При хемостатном культивировании скорость по- риал, создающий вирусы, вводят с помощью шприца (бата-
дачи среды и отъема культуры составляла 0,3 сут-1. реи шприцов) в различные части эмбриона (рис. 6) в асеп-
Таблица 2 тических условиях.
Накопление клеток L 1210 при периодическом и непрерывном Р и с . 6 . Структурные части десяти-
культивировании (по М.Ж. Тови, 1985) дневного куриного эмбриона:
1 – плод, 2 - аллантоисная
Урожайность клеток полость, 3 - хорионалланто-
исная оболочка, 4 - полость
Способ Объем на 1 мг на 1 мл амниона, 5 - оболочка ам-
выращивания среды, л глюкозы среды в неделю ниона, 6 - желточный мешок,
6
× 10 мкг × 106 7 - белочный мешок, 8 - воз-
душное пространство, 9 -
Периодический 0,3 3,5 524 2,3 1,38⋅109 скорлупа, 10 – скорлупная
Непрерывный оболочнка, 11 – введение ви-
0,3 6,2 601 6,2 1,12⋅1010
(хемостатный) русного материала в аллан-
тоисную полость
Естественно, что время, затрачиваемое на подготовку
смежных циклов и их реализацию при периодическом куль-
тивировании, является непроизводительным. Материалом для заражения может быть суспензия
растертой мозговой ткани (для вируса бешенства), печени,
4. ЭМБРИОНАЛЬНЫЕ И ДРУГИЕ ТКАНИ селезенки, почек (применительно к хламидиям орнитоза и
ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСОВ И ПОЛУЧЕНИЯ т.д.). В целях предотвращения бактериального загрязнения
ВИРУСНЫХ ВАКЦИН применяют антибиотики (пенициллин), грибкового загряз-
нения - нистатин и др. полиены.
Из эмбриональных тканей наиболее широко исполь- Чаще всего, суспензию вирусного материала вводят в
зуются эмбриональные ткани цыпленка, мыши и человека. аллантоисную полость или реже на хорионаллантоисную
Особенной выгодой отличаются куриные эмбрионы (по оболочку в количестве 0,05-0,1 мл, прокалывая продезин-
доступности) 10-12-суточного возраста. Они используются фицированную скорлупу (йодированным этанолом) на рас-
для репродукции вирусов и изготовления вирусных вакцин, четную глубину.
а также антигенных препаратов еще с 1931 г. Отверстие закрывают расплавленным парафином и
Инкубированные при 38°С куриные яйца овоскопи- эмбрионы помещают в термостат при температуре 36-
руют (просвечивают), отбраковывают «прозрачные», неоп- 37,5°С. Продолжительность инкубации зависит от типа и
лодотворенные экземпляры и сохраняют оплодотворенные активности вируса. Через 2-4 суток наблюдается изменение
– у них хорошо видны кровеносные сосуды и движение эм- оболочек с последующей гибелью эмбрионов. Зараженные
брионов. эмбрионы контролируют ежедневно 1-2 раза (овосколиру-
23 24
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 10
- 11
- 12
- 13
- 14
- …
- следующая ›
- последняя »
