ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
19 20
3.2. Глубинное выращивание клеток
в суспензионных культурах
Главное отличие – использование микроносителей,
которые увеличивают площадь выращенных клеток. Мик-
роносители суспендируются в питательной среде и на их
поверхности закрепляются клетки, а затем разрастаются в
виде монослоя. Данный метод представляет собой усовер-
шенствованный вариант глубинного выращивания клеток
человека и животных в монослое.
В качестве микроносителей применяют положительно
заряженные ДЕАЕ – сефадексы, сефадексы с коллагеновым
покрытием, отрицательно заряженный полистирол, полые
стеклянные сферы, микросферы из пористого шлачного
стекла. Поры их доступны для пенетрации (лат. Penetratio –
проникновение) клеток внутрь матрикса. Пористые сферы
пригодны для иммобилизации прилипающих и суспензион-
ных клеток (например, гибридом).
Рис. 4. Микросферы для иммобилизации клеток млекопитающих из микропо-
ристых, биологически инертных стекла (а) и стеклошлака (так назы-
ваемого Cultispher-G) (б) увеличение ×10 000
Рекомендуемый размер носителей - 200±25 мкм. Тре-
буемое количество их равно 10
4
/мл, а для инокуляции необ-
ходимо порядка 10
5
клеток. При увеличении количества
микроносителя возрастает доза клеток в инокуляте.
Выбор сред и параметры остаются прежними (разд. 2).
Клетки после выращивания отделяют от микроносителей
центрифугированием (в том числе в градиенте плотности),
фильтрованием или, чаще, обработкой трипсином с после-
дующим промыванием и сепарированием.
Полученные клетки применяют в целях получения ви-
русных вакцин (против бешенства, полиомиелита, ящура).
При культивировании клеток в среду добавляют белки
сыворотки крови, которые играют роль защитной матрицы
– животные клетки имеют высокую ранимость по сравне-
нию с микробными и растительными клетками. Тем не ме-
нее, основные подходы к выбору оборудования и к реализа-
ции биотехнологических процессов животных клеток во
многом аналогичны микробной биотехнологии. Например,
система культивирования одинакова: хемо- или турбиди-
статные, периодические (циклические), непрерывные и по-
лунепрерывные.
3.3. Глубинное выращивание клеток животных
в инкапсулированном состоянии
В противоположительность суспензионным культурам
клеток на микроносителях разрабатываются способы ин-
капсулирования их в полимерные среды (полилизиновые,
агарозные, изоиолимерные слои). В этом случае клетки не
испытывают большого механического напряжения, которые
они должны использовать в свободном виде.
Способ инкапсулирования оказался выгодным для
культивирования гибридом в целях получения монокло-
нальных антител. Диаметр микрокапсул, размер пор в них и
их толщина могут быть независимо проконтролированы в
процессе изготовления и оптимизирования для конкретного
ходимо порядка 105 клеток. При увеличении количества
3.2. Глубинное выращивание клеток микроносителя возрастает доза клеток в инокуляте.
в суспензионных культурах Выбор сред и параметры остаются прежними (разд. 2).
Клетки после выращивания отделяют от микроносителей
Главное отличие – использование микроносителей, центрифугированием (в том числе в градиенте плотности),
которые увеличивают площадь выращенных клеток. Мик- фильтрованием или, чаще, обработкой трипсином с после-
роносители суспендируются в питательной среде и на их дующим промыванием и сепарированием.
поверхности закрепляются клетки, а затем разрастаются в Полученные клетки применяют в целях получения ви-
виде монослоя. Данный метод представляет собой усовер- русных вакцин (против бешенства, полиомиелита, ящура).
шенствованный вариант глубинного выращивания клеток При культивировании клеток в среду добавляют белки
человека и животных в монослое. сыворотки крови, которые играют роль защитной матрицы
В качестве микроносителей применяют положительно – животные клетки имеют высокую ранимость по сравне-
заряженные ДЕАЕ – сефадексы, сефадексы с коллагеновым нию с микробными и растительными клетками. Тем не ме-
покрытием, отрицательно заряженный полистирол, полые нее, основные подходы к выбору оборудования и к реализа-
стеклянные сферы, микросферы из пористого шлачного ции биотехнологических процессов животных клеток во
стекла. Поры их доступны для пенетрации (лат. Penetratio – многом аналогичны микробной биотехнологии. Например,
проникновение) клеток внутрь матрикса. Пористые сферы система культивирования одинакова: хемо- или турбиди-
пригодны для иммобилизации прилипающих и суспензион- статные, периодические (циклические), непрерывные и по-
ных клеток (например, гибридом). лунепрерывные.
3.3. Глубинное выращивание клеток животных
в инкапсулированном состоянии
В противоположительность суспензионным культурам
клеток на микроносителях разрабатываются способы ин-
капсулирования их в полимерные среды (полилизиновые,
агарозные, изоиолимерные слои). В этом случае клетки не
испытывают большого механического напряжения, которые
они должны использовать в свободном виде.
Р и с . 4 . Микросферы для иммобилизации клеток млекопитающих из микропо- Способ инкапсулирования оказался выгодным для
ристых, биологически инертных стекла (а) и стеклошлака (так назы-
культивирования гибридом в целях получения монокло-
ваемого Cultispher-G) (б) увеличение ×10 000
нальных антител. Диаметр микрокапсул, размер пор в них и
их толщина могут быть независимо проконтролированы в
Рекомендуемый размер носителей - 200±25 мкм. Тре-
процессе изготовления и оптимизирования для конкретного
буемое количество их равно 104/мл, а для инокуляции необ-
19 20
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 8
- 9
- 10
- 11
- 12
- …
- следующая ›
- последняя »
